应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大量金币感谢，基因克隆表达。
52/1返回列表
查看: 1450  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhmy26

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大量金币感谢，基因克隆表达。 已有12人参与

我想在E.coli中表达一个外源基因，并且要这个基因表达出来具有酶活性，能够转化底物，合成新的产物。但是有一点不明白的就是：在克隆外源基因的时候，从ATG开始，到TAA结束？还是从更上游的位置开始到更下游的位置结束？这两者之间有什么区别呢？
第二个问题：如果在同一载体上克隆表达两个基因，这两个基因如何连接呢？是第一个基因的TAA直接续接第二个基因的ATG？还是中间需要添加一些片段？
各位大侠啊：我是在读的硕士研究生，要开展分子生物学的课题。由于导师在这方面不太精通，因此求助一个问题。

[ Last edited by zhmy26 on 2010-5-12 at 08:28 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2010-05-05 08:36:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
zhmy26(金币+4): 2010-05-12 22:14:33
引用回帖:
Originally posted by zhmy26 at 2010-05-11 15:20:28:

您所说的linker大概意思我懂，是一种专用的序列吗？
另外，如何才能够注意表达的可溶性和丰度呢？

不好意思，实在是水平太差。这些天看书看的头大。快要进实验室了，却机会一无所知。

[ Last edited by ...

linker序列的设计比较灵活，上网一查就知道了。此外Takara的目录上有一部分linker的序列和介绍，参考一下。

处于不同启动子控制下的表达丰度有差异。蛋白的积累量也影响其表达。这个影响因素太多了。得摸索条件吧。  串联基因，我搞了几次，部分over。
赞一下 回复此楼
13楼2010-05-12 19:03:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

追逐梦想

银虫 (小有名气)
★ ★
zhmy26(金币+1): 2010-05-05 13:54:31
scelab(金币+2):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-05 15:33:23
第一个问题 是 你的质粒上没有启动子的话 要扩ATG前的一段序列，这是启动子序列！
第二是 可以用SOE的方法 吧两个基因连接起来！具体步骤你可以网上搜一下！
赞一下(1人) 回复此楼
追逐梦想！
2楼2010-05-05 08:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
zhmy26(金币+2): 2010-05-05 13:54:51
scelab(金币+4):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-05 15:33:31
有很多载体可以选择，比如pet系列的。看你的要求，你可以使用非融合表达，即表达时不带标签，可以表达出天然的目的蛋白。一般表达载体都是载体具有启动子的，不需要自行添加，你只需将目的基因插入相应的酶切位点就可以了，至于终止，你可以使用载体上的终止子，你也可以在设计引物时自己加上双终止子TGATAA，我们一般都是自己加双终止子。表达的时候，载体是从启动子之后的第一个ATG开始表达，直到终止密码子。
第二个问题，现在有很多双表达系统可以选择，这种系统具有多个启动子，可以插入多个目的基因，这种系统表达出来的每个蛋白是独立分开的。而楼上介绍的SOE拼接表达出来的两个蛋白一般是连在一起的。
赞一下(1人) 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
3楼2010-05-05 09:34:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
zhmy26(金币+1): 2010-05-05 13:56:02
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-05 15:33:38
1，如果是在大肠中表达只需要ORF就可以了，一般商业化的表达载体都含有启动子和终止子，你只需要把你的orf插入到启动子与终止子中间的多克隆位点
2.在同一载体上表达两个基因，一般需要两个转录单元，每个基因在各自的启动子控制之下
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-05-05 09:40:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +8 硕星赴 2026-03-23 8/400 2026-03-24 20:17 by peike
[考研] 0854 考研调剂 招生了！AI 方向 +5 pk3725069 2026-03-19 17/850 2026-03-24 17:30 by zhouxuan..
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +7 holy J 2026-03-21 7/350 2026-03-24 17:24 by xiaohai104
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 材料专硕英一数二306 +8 z1z2z3879 2026-03-18 8/400 2026-03-23 20:49 by baobaoye
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 求调剂材料学硕080500，总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭