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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择! 已有9人参与

目的片段被T/A克隆进pUCM-T vector中,现把酶切位点EcoRⅠ/BamHⅠ设计进引物中,想把目的片段扩增出来,目的片段大小1.6kb,有文章用Pfu酶PCR,好像Pfu酶的扩增效率很低,能用LA Taq DNA polymerase么?
补充:Pfu酶的PCR产物是否具有A末端,便于后续的T/A克隆????高人指点一二!

[ Last edited by feiye2214 on 2010-5-3 at 22:57 ]
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-16 08:42:09
PBO和KOD事不加A的,1.6K的片段用普通的Taq酶延伸1:10就足够了,另外Pfu的扩增效率虽没有Taq高但它扩增大片段(2K以上)的保真性比Taq要好很多,所以你用LA的话也是没什么问题的。
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
12楼2010-06-15 22:34:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3):good 2010-05-03 17:10
普通Taq酶即可~1.6不算长,到时候挑多几个去测序就完事了
当然,用质粒做模板是非常好扩的~所以用Pfu也无所谓,适当延长延伸时间
2楼2010-05-03 16:57:09
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上

★ ★
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amisking(金币+1):最近很活跃,谢谢支持生物科学版! 2010-05-04 08:14
用普通的高保真酶就可以了,片段不算长
终于熬成木虫了……
3楼2010-05-03 17:09:16
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lingn

木虫 (正式写手)

★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-03 23:01
LA tag的保真性不高,推荐用KOD,我们实验室一直在用,4、5k以内的都没问题,扩增效率也不错
4楼2010-05-03 17:30:04
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