| 查看: 1847 | 回复: 7 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
yidaqunyan木虫 (正式写手)
博士
|
[交流]
【求助/交流】请问各位老师，用蛋白酶K去除RNASE可行吗？ 已有3人参与
|
||
|
各位老师，我在网上偶然看到这一个帖子： 蛋白酶 K 的妙用，我曾经在别的论坛发表。坦率地说，蛋白酶 K 的这个用途，是我的得意之作之最。不是因为该发现有什么创新，而是因为它的实用性。当别人还在讨论 DEPC 有什么毒性，讨论那一家公司的 DEPC 好时，我早就在使用蛋白酶 K 替代 DEPC 实现灭活 RNase A 的目的了。[不过有一点还是要声明，我没有使用该方法制备的水用于溶解 RNA。原因不是在于我对该方法的担心，而是我没有制备高纯水 (Millipore 水) 的设备。与保存及酶反应有关的水，除了酶的残留是一个考虑因素外，水的纯度也是我考虑的；这种用途的水，我使用的是 Sigma 进口的无酶的 Millipore 水 （也不是 DEPC 处理的水）。我的用途很特殊，首先要求最高纯度的水，所以我只能付出更大的代价。] 看这篇东西，我不知道大家的最大担心是什么；最早我的最大担心是蛋白酶 K 的”尸体“是否会对后续实验产生影响。做过的实验证明我的担心是多余的。 ========================================== 蛋白酶 K，威力巨大的广谱蛋白酶，95C 加热10 分钟，则完全失活。数年前首次使用它替代 DEPC 处理 RNA 抽提用的离心管和枪头，效果不错；后来又用于处理 RNase-Free的水，效果也是一级棒。从此就再也不用 DEPC 了。现在将它的细节公开，与大家分享。 配制 RNA 裂解试剂时，直接用灭菌的双蒸水配制，最后，加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀，室温放置 15 分钟后即可。 枪头及离心管去除 RNase：先将枪头及离心管清洗干净后，移入预先混好的含 1ug/ml 蛋白酶 K 的双蒸水，彻底浸入。室温放置 30 分钟后，连水一起高压灭菌。弃水后，烘干即可。 RNase-Free 水的获得：直接在灭菌的双蒸馏水中加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀，室温放置 15 分钟后，灭菌处理即可。该蛋白质的残留对后续实验没有可见的影响。 无蛋白质残留的RNase-Free 水的获得：这比较麻烦。直接在灭菌的双蒸馏水中加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀后，倒入专用的蒸馏器中。放置 15 分钟后，加热蒸馏，流出的就是无蛋白质残留的RNase-Free 水。要提醒的是，该专用蒸馏器头几次流出来的水，只能当普通蒸馏水用，因为通道中难确保 RNase-Free 的环境；另外，一定要主要密闭性，否则，流出的水又被污染了。 我比较茫然。不知道这个帖子是不是准确的是不是可以使用的。我担心一个是效果问题，另外一个是蛋白酶K的残留问题，有些残留会不会影响到以后的实验？比如RT等等。 不知道有没有老师用过这个方法，我想请教一下~ 谢谢各位老师的关注！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有186人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
yidaqunyan
木虫 (正式写手)
博士
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1974.1
- 散金: 22
- 红花: 1
- 帖子: 495
- 在线: 133小时
- 虫号: 690666
- 注册: 2009-01-09
- 专业: 中医养生与康复
2楼2010-04-20 20:54:24
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
3楼2010-04-20 22:22:24
yidaqunyan
木虫 (正式写手)
博士
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1974.1
- 散金: 22
- 红花: 1
- 帖子: 495
- 在线: 133小时
- 虫号: 690666
- 注册: 2009-01-09
- 专业: 中医养生与康复
4楼2010-04-20 23:24:49
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
5楼2010-04-20 23:51:27
yidaqunyan
木虫 (正式写手)
博士
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1974.1
- 散金: 22
- 红花: 1
- 帖子: 495
- 在线: 133小时
- 虫号: 690666
- 注册: 2009-01-09
- 专业: 中医养生与康复
6楼2010-04-21 11:00:42
zhenpeng84
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 147
- 散金: 132
- 红花: 1
- 帖子: 100
- 在线: 14.6小时
- 虫号: 991850
- 注册: 2010-04-08
- 性别: GG
- 专业: 合成药物化学
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢交流~~ 2010-04-21 18:30
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢交流~~ 2010-04-21 18:30
|
有些产品的价格确实昂贵，而且存在一定风险，同时价格也相对昂贵，。 我之前去除RNASE的时候用了好像叫一个普格斯的RNA酶清除剂，效果还不错，最高稀释比例为1：1000，价格上也不太贵，好像相比国外的一些品牌还不到一半，并且是无毒的，用起来还好，呵呵。 之前是一个朋友介绍给我用的，如果你感兴趣的话，给我邮件，我帮你找找看看还能不能找到了。 我邮箱的地址是zhenpeng84@163.com |
7楼2010-04-21 17:09:54
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
8楼2010-04-21 20:33:23
