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【求助】硅胶薄层层析与柱层析结果分析？ 已有7人参与
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各位虫友，我的实验结果如下：硅胶薄层层析采用正己烷：乙酸乙酯：甲醇=3：1：1展开如图1所示 ，于是我采用硅胶柱层析，柱高7cm，直径1.5cm,洗脱剂为展开剂，每个试管收集10ml，浓缩后，点薄层层析板，结果见图2， 大家帮忙分析一下？以此展开剂作洗脱剂是否合适？现在还不知道，哪个斑点是我所需要的。通过分析，第一管就有斑点，第5、6管出现2个斑点，共收集了10管，11和12为上样样品，大家分析一下，这样的结果说明了什么？我又做了加入乙酸的实验，如图3所示 ，（所点的样品都是相同的）标有5%，10%为展开剂中加入了5%和10%乙酸后薄层层析后的结果，0表示不加入乙酸，大家看一下，用加有乙酸的展开剂作洗脱剂是否可以？ |
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2楼2010-04-20 08:36:03
3楼2010-04-22 22:26:55
pdw_david
木虫 (小有名气)
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首先想说的是依你所示的板层结构,用展开剂当洗脱剂是不可能分开的.因为大致看来你的体系中有5个点,以200-300目的硅胶柱为例,当TLC中的点Rf=0.5时一般就可认为:用展开剂作洗脱剂就可很快将此点洗脱下来.(你可以将柱子看作是TLC的放大版) 所以当你要分离的点附近无明显杂质点时才可以用这个极性洗脱,如果有杂质视其与目标点的远近来缩小极性来洗脱,如果相差Rf>=0.3一般极性减小为展开剂的1/2,相距越近洗脱剂的极性越小.(教科书上说是5~10倍,但是这并不是固定的,以你的柱层析能力和体系的复杂程度而定). 此外,在分析体系中哪个点是你需要的过程中,应先分清那些是原料,其他才可能是产物.然后判断你的产物势必原料的极性大还是小,然后找的相应位置的最大的一点分离并鉴定,如果不是再分离其它点.(注:在没有确定那个是产物前,其他的"杂质"不要扔,万一你分离得到的不是你要的,还可以再分离其他点) 最后说一下:你之前的板层结构还不错,值得分离,但是你加入乙酸后相当于加大展开剂得极性,所以使得一些点跑到一起,所以点有所减少.(如果同一个体系在TLC过程中,有一种展开剂失的体系中有5个点,而其他的展开剂只展开3个点,那也许要相信5个点的那块板!) [ Last edited by pdw_david on 2010-4-22 at 23:46 ] |
4楼2010-04-22 23:41:59
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