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feiye2214木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】如何克隆未知序列的β-actin 的启动子 已有5人参与
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我的目的是克隆头足类（我的研究对象就是一种乌贼）的β-actin 的启动子，构建表达性强的重组载体质粒。 目前能查到很多的物种的β-actin 的启动子的序列，但是保守性不行，而且没有头足类的相应序列。所以我认为无法用简单的PCR操作来设计引物并克隆该启动子。 各位大侠给我指点一二啊。要么克隆β-actin 的启动子，要么更换更好的更易获取的启动子。谢谢大家帮助啦 |
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5楼2010-04-19 16:42:22
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这个有一定风险，有可能很好做有可能很不好做，需要看运气： 常用Tail-pcr，这个需要你根据已知序列（这里用β-actin基因的序列）设计特异性引物，并设计随机引物； 另外就是genome walking了，需要adaptor和几种内切酶以及设计特异性引物，有试剂盒； 通常要拿到promoter全序列可能要做好几轮。 你看看这篇文章吧，有用的： http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=8859597hpvv5u4pvtb9bkho |
3楼2010-04-19 12:52:35
4楼2010-04-19 13:47:00
