应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒连接问题
51/1返回列表
查看: 669  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

[交流] 【求助/交流】质粒连接问题 已有4人参与

求大大们：质粒连接的原理是什么啊？如果需要内切酶切开DNA，切开质粒的还好理解，但是要把目的片段的切开，再连接到质粒上，就不好理解了。那样岂不是把目的片段破坏了？还怎么测序什么的啊？而且，连接上目的片段的质粒也不能回复为环状，怎么进入到感受态细胞呢？
PS：我转化好的产物因为有多余，所以放在4度保存，大概3天了，会不会失效呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
不忘初心，为梦远行。
1楼 2010-04-17 11:47:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

entomology557

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-17 18:13
lstt09nk(金币+2): 2010-04-17 19:06
引用回帖:
Originally posted by leon198418029 at 2010-04-17 16:33:02:


多谢！不过，目的片段是怎么通过PCR连上酶切位点的？它的两端不是引物吗？这么巧合每对引物都会有粘性末端吗？

一般设计引物的时候就需要考虑加上酶切位点，需要注意的是目的片段内部不能还有同样的酶切位点，不然就乱切了
赞一下(3人) 回复此楼
生物进化基本常识：一定范围内，选择压力越大，要么进化的越快来适应这种压力，或者直接被淘汰。
4楼2010-04-17 17:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-17 13:31
目的片段经PCR后两端已经连接上酶切位点的，所以酶切但时候切的是两端，不会破坏片段本身，目的片段和质粒的链接也是通过酶切位点的粘性末端链接的，会成环状的
放在4度3天应该还能用，但是建议放在-20，如果长期不用的话~
赞一下(2人) 回复此楼
坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~
2楼2010-04-17 12:21:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
引用回帖:
Originally posted by lstt09nk at 2010-04-17 12:21:02:
目的片段经PCR后两端已经连接上酶切位点的，所以酶切但时候切的是两端，不会破坏片段本身，目的片段和质粒的链接也是通过酶切位点的粘性末端链接的，会成环状的
放在4度3天应该还能用，但是建议放在-20，如果长期 ...

多谢！不过，目的片段是怎么通过PCR连上酶切位点的？它的两端不是引物吗？这么巧合每对引物都会有粘性末端吗？
赞一下 回复此楼
不忘初心，为梦远行。
3楼2010-04-17 16:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
★ ★
lstt09nk(金币+2):万事开头难，加油~~ 2010-04-17 19:11
引用回帖:
Originally posted by entomology557 at 2010-04-17 17:02:21:


一般设计引物的时候就需要考虑加上酶切位点，需要注意的是目的片段内部不能还有同样的酶切位点，不然就乱切了

我连接用的是T-vector。刚刚研究了一下，理论上使用T-vector是可以连接所有PCR产物的，所以设计引物时不需要考虑酶切位点。不过设计时合理加入酶切位点会更好一些。
谢谢你关于目的片段内部酶切位点的提醒。在茫茫“碱基海”中考虑和寻找酶切位点，真是很累啊。
赞一下(1人) 回复此楼
不忘初心，为梦远行。
5楼2010-04-17 17:14:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 16/800 2026-03-22 11:20 by 脱颖而出
[考研] 306求调剂 +3 来好运来来来 2026-03-22 3/150 2026-03-22 11:11 by 杨杨杨紫
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 4/200 2026-03-22 11:04 by 搏击518
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 化学工程321分求调剂 +18 大米饭！ 2026-03-15 22/1100 2026-03-21 20:20 by HH领袖
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭