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【求助/交流】求助蛋白表达的难题 已有1人参与
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大家好，本人最近在表达一个蛋白，蛋白全长大约有170KD,我用的是pdest系列的载体，之前我已经把载体做好了，然后转化bl21，之后小量诱导跑胶发现蛋白可能是降解或者是提前终止了，在100kd左右出现了我的目的蛋白（western检测）。之后我又重新把载体构建，重新转化了bl21，再次跑胶，western却什么也检测不到了。我比较奇诡的现象是我转化bl21后，小量诱导的时候，菌液先摇起来了，之后就开始澄清，菌体变成絮状，沉淀，过夜之后菌液又浑浊了，我是把过夜培养的菌转接后做的小量诱导。总之让人感觉怪怪的。 大家帮我分析分析是怎么回事？是我的蛋白自身的原因还是细胞的问题。有什么好的方法可以把这么大的蛋白表达出来。 |
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