24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 272  |  回复: 1
当前主题已经存档。

plantst5928

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助蛋白表达的难题 已有1人参与

大家好,本人最近在表达一个蛋白,蛋白全长大约有170KD,我用的是pdest系列的载体,之前我已经把载体做好了,然后转化bl21,之后小量诱导跑胶发现蛋白可能是降解或者是提前终止了,在100kd左右出现了我的目的蛋白(western检测)。之后我又重新把载体构建,重新转化了bl21,再次跑胶,western却什么也检测不到了。我比较奇诡的现象是我转化bl21后,小量诱导的时候,菌液先摇起来了,之后就开始澄清,菌体变成絮状,沉淀,过夜之后菌液又浑浊了,我是把过夜培养的菌转接后做的小量诱导。总之让人感觉怪怪的。
大家帮我分析分析是怎么回事?是我的蛋白自身的原因还是细胞的问题。有什么好的方法可以把这么大的蛋白表达出来。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
分析断裂处是否是大量稀有密码子串联出现的地方,如果是,断裂就比较常见了。
方法:分析DNA序列中的稀有密码子,找出串联出现的地方,算一下该地方断裂后蛋白的大小,看是否有与100kd吻合的?

170kd的算是个相当大的蛋白了!!!!
你描述的菌液摇活后变澄清貌似感染噬菌体的症状!!!!过夜再摇活的可能就不是大肠杆菌了,这样你就算诱导也检测不到蛋白表达。
2楼2010-04-16 00:08:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 plantst5928 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +16 雪逢冬 2026-04-10 16/800 2026-04-14 14:27 by 逆水乘风
[考研] 290调剂生物0860 +29 哇哈哈,。 2026-04-11 32/1600 2026-04-14 13:49 by 陈皮皮
[考研] 300分求调剂 (085501机械专硕,本科扬大) +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu~
[考研] 一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂 5+5 chenny174 2026-04-10 37/1850 2026-04-14 07:39 by Abskk
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[考研] 求调剂 +9 吃口冰激凌 2026-04-07 9/450 2026-04-13 08:46 by 紫曦紫棋
[考研] 求调剂288 +7 ioodiiij 2026-04-10 9/450 2026-04-13 08:33 by Hayaay
[考研] 085410 273求调剂 +10 X1999 2026-04-09 10/500 2026-04-12 09:24 by 逆水乘风
[考研] 求调剂,262机械专硕 +8 嗯yyl 2026-04-08 8/400 2026-04-12 02:31 by 秋豆菜芽
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +6 青灯不负 2026-04-09 6/300 2026-04-11 20:35 by dongdian1
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +6 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-11 20:14 by 逆水乘风
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 309求调剂 +14 wdhw 2026-04-10 15/750 2026-04-10 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 301求调剂 +5 149. 2026-04-10 5/250 2026-04-10 15:45 by 柴小白
[考研] 求调剂材料科学与工程一志愿985初试365分 +5 材化李可 2026-04-08 5/250 2026-04-09 17:00 by Lilly_Li
[考研] 349学科化学045106求调剂,化学类都可以 +8 保好懂懂 2026-04-08 8/400 2026-04-09 14:03 by xulei3024
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
信息提示
请填处理意见