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【求助】关于生物酶的热稳定性研究！ 已有5人参与
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大家好啊，我现在研究的是淀粉酶和果胶酶的热稳定性。但是实验过程中出现了很多问题！比如：这两种酶的测试活力方法；在酶中加入热稳定剂后，数据的不准确性；还有在酶中，加入物质后，热稳定性的公式的推算，Arrhenius公式来算的啊，但是按照这个公式，拟合出来应该是直线，但是实际上数据很乱，现在我也不知道怎么办啦，请各位高手帮帮忙啊！非常感谢！ 方法一： 如果α-淀粉酶的失活遵循一级动力学，则我们可以得到：lnA=-kt+lnA' 中A'为α-淀粉酶的初始酶活，A为孵化时间为t时的剩余酶活，k为失活速率常数。以lnA对t作图，通过线性拟合求得的斜率即为α-淀粉酶在此温度下的失活速率常数k。 根据Arrhenius公式，lnk=-Ea/RT+C 其中，Ea为失活活化能，T为孵化时的绝对温度。在温度变化范围不大时，活化能可以看作常数，以lnk对1/T作图应得直线，通过斜率可算出活化能Ea。 不同温度下α-淀粉酶的活化焓和失活自由能分别为： 在溶液中反应时， △H=Ea+△pV约等于Ea （2-4） △G=-RTln（kh/KT) （2-5） 其中，h (6.6262×10-34 J)为 Planck 常数, K (1.3806×10-23 J K-1) 为Boltzmann 常数。α-淀粉酶的热失活活化熵（ΔS）可通过式（2-4）和（2-5）计算： ΔS=( △H -△G )/T 这是我找到的一种方法，还有一种算法我放在下面 方法二： α-淀粉酶的热变性 不同浓度的助溶剂对α-淀粉酶的热变性的影响通过分光光度计在287nm处比色皿厚度1cm，扫描速率1℃/min，温度范围在30至90℃测试。α-淀粉酶的(Tm)app通过计算原始和变性后酶的状态得到。酶的片段展开（Fu）在不同温度下获得，(Tm)app通过下式计算得到： Fu=(At-An) /(Ad-An) （3） 式中，An和Ad分别是蛋白质原始和变性后的吸光度，At是在T温度下蛋白质的吸光度。在(Tm)app的标准焓变（∆H）和标准熵变（∆S）通过蛋白质变性平衡系数计算得来. K=Fu/(1-Fu) （4） △G=-RTlnK （5） 在(Tm)app下蛋白质的原始和变性的状态处于平衡，因此K=1，∆GO=0。计算式如下： ∆S=∆H/T （6） ∆H=-Rd(lnK)/d(1/T) （7） 式中R是通用气体常数，T是绝对温度。 想请问下大家，关于这两个求热稳定性的公式，哪一个好些，我不知道该怎么办了，我也不是学生物专业的，现在做这个实验很头疼！ 还有就是，在第一个方法中提到了如果α-淀粉酶的失活遵循一级动力学，他只是说如果，可是只要做过实验的人都会觉得，拟合出来根本就不是直线，那我自己拟合 怎么办啊，因为动热力学的公式很多，有很多拟合的结果，有的是一级的，有的是二级的，还有更高级的啊！如果大家有这方面好的文献，可以给我看看吗？ |
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