应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教关于大肠杆菌lamda RED重组问题
242/3返回列表上一页123下一页
查看: 5729  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xmuwangym

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhangjingfei01 at 2010-04-12 14:04:47:
pkobeg质粒，比那个pKD46好一些。

您好！能麻烦您介绍一下那个质粒吗？
赞一下 回复此楼
厚德载物
11楼2010-07-09 21:47:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
hanjun80(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by xmuwangym at 2010-07-09 21:46:27:

您好！能麻烦您介绍一下这个质粒吗？？谢谢！

pKD46来源的一个质粒，有篇文献介绍过这个质粒的来源，具体是那篇还得查阅之后再告诉你，呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
12楼2010-07-10 19:21:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmuwangym

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-10 19:21:43:

pKD46来源的一个质粒，有篇文献介绍过这个质粒的来源，具体是那篇还得查阅之后再告诉你，呵呵

谢谢您哈，辛苦了~~
赞一下(1人) 回复此楼
厚德载物
13楼2010-07-19 21:34:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenlin0514

木虫 (正式写手)

无名小虫
引用回帖:
Originally posted by xmuwangym at 2010-07-09 21:46:27:

您好！能麻烦您介绍一下这个质粒吗？？谢谢！

red同源重组中，常用的表达噬菌体重组酶的质粒是pastuer研究所的pKOBEG质粒，它含有araC启动子，培养条件是30度，建议制作含有该质粒的感受态时在OD600为0.2-0.3时进行L-ara诱导，0.6时制作电转感受态。
赞一下 回复此楼
Never say never
14楼2010-07-20 15:18:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

创强

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最近我也在做这个东西，但确实麻烦，很奇怪的是我做完电转化涂板后长出的少数几个单菌落，菌落PCR结果刚P出来时候是对的，在4°冰箱放了两天，跑电泳结果就变小 了，感觉是被降解了，但DNA这么稳定，怎么会被降解呢？？？
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2010-08-08 20:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimny22

金虫 (正式写手)
学习了！ 谢谢
回复此楼
It is of no use crying over the spilt milk!
16楼2011-05-29 15:09:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鹏飞九万里

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
必须得电转。。。哪有文献说是化转。。。
赞一下(2人) 回复此楼
17楼2011-05-29 16:38:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangbin1

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这个问题我也遇到了主要解决方案：
1.缩短阿拉伯糖有到时间（1h足够，文献中给出的最小20min），诱导时间延长会使得自发突变的频率加大。
2.想办法用电转化，文献中一般都是用的电转化。
3.如果你缺失的这个基因对你这个菌本身很重要，缺失以后会致死，你也不能得到正确结果。
我现在在宿舍，关于相关文献你若需要明天可以到实验室后发给你，希望对你有帮助。
赞一下(3人) 回复此楼
18楼2011-05-29 23:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanjun80

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yangbin1 at 2011-05-29 23:28:56:
这个问题我也遇到了主要解决方案：
1.缩短阿拉伯糖有到时间（1h足够，文献中给出的最小20min），诱导时间延长会使得自发突变的频率加大。
2.想办法用电转化，文献中一般都是用的电转化。
3.如果你缺失的这个基 ...

多谢多谢，俺的RED重组已经上轨了
赞一下 回复此楼
我笃信:人定胜天！
19楼2011-05-30 07:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
19628095楼: Originally posted by gandalf886 at 2010-04-11 18:35:35:
1、用带有45bp同源臂的引物，PCR扩增卡那霉素或氯霉素基因；
同源臂可以延长。
2、用切胶回收的方法纯化PCR产物，100微升PCR产物最终浓缩为50微升；
你用什么酶P的，文献上说是taq加pfu，DpnI消化降解pKD3/4模 ...

鉴定引物就是同源臂的部分序列可以不呢，引物只要是敲除成功了，那么扩增出来的应该就是抗性基因片段的大小，而不是欲敲掉的基因的大小
赞一下 回复此楼
20楼2012-05-16 00:59:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hanjun80 的主题更新
242/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭