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xiangquanju

金虫 (小有名气)

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19649690楼: Originally posted by berg at 2010-04-12 12:59:46:
red重组的两个关键条件是重组片段的浓度和转化效率,胶回收的后片段用乙醇沉淀进一步提高浓度,电转化是必须的,化转不能满足基因敲除的需要!

重组片段的浓度需要很高么,我看文献都是写的50ul细胞加100ng DNA
是不是越多越好啊
21楼2012-05-16 01:02:49
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沁荃

金虫 (小有名气)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by yangbin1 at 2011-05-29 23:28:56
这个问题我也遇到了主要解决方案:
1.缩短阿拉伯糖有到时间(1h足够,文献中给出的最小20min),诱导时间延长会使得自发突变的频率加大。
2.想办法用电转化,文献中一般都是用的电转化。
3.如果你缺失的这个基因 ...

你好~我想问一下你们电转片段的感受态一般都OD长到多少的时候做啊~还有我是电转切胶回收的片段,为什么每次都很多假阳性克隆,真正整合的很少,这是什么原因啊~谢谢~
22楼2014-06-25 14:21:26
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向日葵和梦缘

新虫 (初入文坛)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
pKD46质粒提取验证总有10000的条带怎么回事

发自小木虫Android客户端
23楼2017-03-23 14:53:32
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huanhuanha

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
菌长出来很多,PCR一直检测不出来,也可能是你的抗性失效了,或者说你的菌里面本身被污染含有了这种抗性。可以做一个抗性检测先试试
24楼2017-03-24 15:18:41
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