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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】问一个弱的问题
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rena6816

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】问一个弱的问题 已有5人参与

在做蓝白斑时，挑选白色菌落使用pcr法确认载体中插入片段的长度大小。在这里如何操作pcr法确认载体中插入片段的大小？？/谢谢了
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1楼 2010-04-08 11:17:41
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-04-08 12:41
使用测序的通用引物，查一下你的载体含有的通用引物，然后用这对 引物做PCR，产物大小是载体在引物间的片段大小加上插入片段的大小
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2楼2010-04-08 11:35:51
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silicare

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amisking(金币+2): 2010-04-08 12:41
T载体旁边一般都有通用引物的,比如T7,sp6之类的，你也可以自己设计引物
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3楼2010-04-08 11:40:40
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dy_414

木虫 (正式写手)
★
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通过引物控制，就是用引物的选择控制中间基因的大小
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我坚信，rp是攒出来的
4楼2010-04-08 12:35:35
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3): 2010-04-08 13:48
你连接进载体的东西是咋得到的啊，是用PCR之后纯化产物才能连接转化的吧，就用你之前PCR的引物就可以做菌落PCR了，PCR管先加好除了酶以外的其他试剂，牙签沾取一点点的白斑放入PCR管里，之后我记得有个九十多度的煮沸的过程，再加酶就可以正常PCR了。具体的操作流程你网上搜一下吧，记不太清了。
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5楼2010-04-08 13:27:35
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 2010-04-08 13:48
如果菌P扩出来的结果和你之前PCR的结果是一样的就对了，如果不对就说明不是阳性克隆，没有就说明你可能没连上，或者啥地方出问题了。
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6楼2010-04-08 13:28:29
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acaifeng

银虫 (初入文坛)
★
scelab(金币+1):谢谢交流！:tiger06: 2010-04-08 18:43
做菌液pcr就好，我们经常这样做，很少出现假阳性的情况，结果还是挺可靠的！
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7楼2010-04-08 16:54:52
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