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rena6816

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】问一个弱的问题已有5人参与

在做蓝白斑时,挑选白色菌落使用pcr法确认载体中插入片段的长度大小。在这里如何操作pcr法确认载体中插入片段的大小??/谢谢了
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
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amisking(金币+1): 2010-04-08 12:41
使用测序的通用引物,查一下你的载体含有的通用引物,然后用这对 引物做PCR,产物大小是载体在引物间的片段大小加上插入片段的大小
2楼2010-04-08 11:35:51
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-04-08 12:41
T载体旁边一般都有通用引物的,比如T7,sp6之类的,你也可以自己设计引物
3楼2010-04-08 11:40:40
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dy_414

木虫 (正式写手)


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通过引物控制,就是用引物的选择控制中间基因的大小
我坚信,rp是攒出来的
4楼2010-04-08 12:35:35
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amilie030312

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3): 2010-04-08 13:48
你连接进载体的东西是咋得到的啊,是用PCR之后纯化产物才能连接转化的吧,就用你之前PCR的引物就可以做菌落PCR了,PCR管先加好除了酶以外的其他试剂,牙签沾取一点点的白斑放入PCR管里,之后我记得有个九十多度的煮沸的过程,再加酶就可以正常PCR了。具体的操作流程你网上搜一下吧,记不太清了。
5楼2010-04-08 13:27:35
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amilie030312

金虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2): 2010-04-08 13:48
如果菌P扩出来的结果和你之前PCR的结果是一样的就对了,如果不对就说明不是阳性克隆,没有就说明你可能没连上,或者啥地方出问题了。
6楼2010-04-08 13:28:29
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acaifeng

银虫 (初入文坛)


scelab(金币+1):谢谢交流!:tiger06: 2010-04-08 18:43
做菌液pcr就好,我们经常这样做,很少出现假阳性的情况,结果还是挺可靠的!
7楼2010-04-08 16:54:52
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