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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于PCR产物作为模板再进行PCR的问题,求助
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wwsw38

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于PCR产物作为模板再进行PCR的问题,求助 已有7人参与

我好不容易才P出来的一种16SRDNA,但别人说杂质过多不好测序.请问有谁知道PCR产物能不能直接作为模板进行扩增?如果能的话取一微升产物到50微升的体系中进行扩增会不会太多了?
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为自己加油
1楼 2010-04-06 21:18:00
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zzw1221

木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1): 2010-04-06 21:52
你电泳的时候胶浓度稍大点，跑的时间长点，使条带尽量分开，找到你的目的条带切胶纯化测序。
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2楼2010-04-06 21:38:38
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)
★
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可以的，有杂质的情况下也没问题，只要你确定P的时候只要对引物没应影响就行了，我同学刚做了你说的。
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望大家都各有所获！
3楼2010-04-06 21:47:23
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wenzhenice

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
its better to dilute the PCR product 10 times or 100times,then use it as template
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4楼2010-04-07 04:28:18
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匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):谢谢交流！:tiger06:你工作的时间都是欧洲时间啊~ 2010-04-07 12:38
本帖仅楼主可见
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5楼2010-04-07 04:38:36
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):谢谢交流！:tiger06: 2010-04-07 12:39
我曾经读过一本书：即使泳道里面没有产物条带，也可以在此产物应该出现的位置将胶切下来进行回收，并再进行PCR，以增加产量或提高纯度。估计这个方法能解决你的杂质过多问题，也许杂质是破碎的产物DNA或引物等引起的吧。
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不忘初心，为梦远行。
6楼2010-04-07 11:20:15
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zdfang83

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我的测序结果说出现双峰，可能是非单克隆引起的
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7楼2010-04-08 11:14:28
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
你这个切胶回收，克隆后测序一定会解决的，但是做二次PCR却未必能解决，有的时候二次扩还是有杂带，或产物不纯。关于二次测浓度问题，一般是条带清晰的，要稀释10-50倍，25ul体系1ul就够了，看不到条带的直接原液
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8楼2010-04-08 11:40:50
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