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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为何SDS-PAGE浓缩胶不能把样品压成一条窄线？
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hare1212

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为何SDS-PAGE浓缩胶不能把样品压成一条窄线？ 已有9人参与

请教各位大侠，我最近做SDS-PAGE，但是问题百出，首先是浓缩胶并不能把我的样品压成一条线进入分离胶；其次是我每次跑的条带都有弥散的现象；还有就是我的条带总是不直，总是向边缘倾斜；我做了几次都是这样，不知道是何原因，郁闷中，请高手指点迷津！感激不尽！附上我的SDS-PAGE照片。
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1楼 2010-04-04 22:55:40
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angel2536

金虫 (著名写手)
★ ★
hare1212(金币+1): 2010-04-05 12:27
1949stone(金币+2): 2010-04-06 09:23
感觉弥散和歪有可能是电流过大，放热造成的。可以试下将其放在冰盒上试下，效果可能会好些的
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2楼2010-04-05 10:58:13
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tangw_007

银虫 (小有名气)
★ ★
hare1212(金币+1): 2010-04-05 12:27
1949stone(金币+2): 2010-04-06 09:23
我建议你的浓缩胶用百分子五的，还有我觉得你的上样量有问题，上样液你也应该考虑考虑，在就是我觉得你上样时尽量对称平衡，尽量用中间的不要用两边的。
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3楼2010-04-05 11:09:23
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hare1212

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by angel2536 at 2010-04-05 10:58:13:
感觉弥散和歪有可能是电流过大，放热造成的。可以试下将其放在冰盒上试下，效果可能会好些的

恩，确实电泳跑完有点温热的感觉，我再试试。还想请教为什么我的浓缩胶不能把样品压成一条直线呢？
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4楼2010-04-05 12:29:25
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hare1212

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tangw_007 at 2010-04-05 11:09:23:
我建议你的浓缩胶用百分子五的，还有我觉得你的上样量有问题，上样液你也应该考虑考虑，在就是我觉得你上样时尽量对称平衡，尽量用中间的不要用两边的。

我上样20uL，我再试试加大浓缩胶浓度。谢谢大侠。
还想请教我做PAGE的时候，marker就跑不出条带，这是为什么呢？是因为没有加SDS么？但是PAGE的浓缩胶就可以把样品压成一条窄线，这是什么原因呢？
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5楼2010-04-05 12:32:00
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a09050074

铜虫 (小有名气)
★ ★
hare1212(金币+1): 2010-04-05 12:49
1949stone(金币+2): 2010-04-06 09:23
我也没怎么做过，不过在想1。你的电压好像真的有点大了，建议调低电压（放小冰盒），电压不要超过100v  2。你跑胶的电泳液每次都换吗？最好每次都换一下。。
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6楼2010-04-05 12:37:32
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hare1212

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by a09050074 at 2010-04-05 12:37:32:
我也没怎么做过，不过在想1。你的电压好像真的有点大了，建议调低电压（放小冰盒），电压不要超过100v  2。你跑胶的电泳液每次都换吗？最好每次都换一下。。

电泳液确实是反复用的，不过这次的是新配制的。下次准备降低电压，试试看。谢谢~
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7楼2010-04-05 12:48:57
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dyszz

铜虫 (小有名气)
★ ★
hare1212(金币+1): 2010-04-05 16:48
1949stone(金币+2): 2010-04-06 09:23
我感觉好像电泳液不好，，你可以换新的电泳液，电压一般在120V以下。再就是你做胶的时候注意点，胶要均匀
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8楼2010-04-05 16:28:44
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jAnmee

银虫 (正式写手)
★ ★
1949stone(金币+2): 2010-04-06 09:23
hare1212(金币+1): 2010-04-07 21:05
引用回帖:
Originally posted by dyszz at 2010-04-05 16:28:44:
我感觉好像电泳液不好，，你可以换新的电泳液，电压一般在120V以下。再就是你做胶的时候注意点，胶要均匀

靠，我每次电压都是200V！好不得了。。。单胶30W，双胶60W。我怀疑是缓冲液问题及分离胶的浓度问题吧。10-12%你都可以试下。。楼主把自己参数公布下哦。。。
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国荣，家驹，MJ，为什么我喜欢的恩都死了。。。。
9楼2010-04-06 01:36:12
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
hare1212(金币+1): 2010-04-07 21:40
你的下层胶没有凝好
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10楼2010-04-06 09:55:26
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