| 查看: 921 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 zhlzuo 的 1 个金币 | |||
zhlzuo新虫 (初入文坛)
|
[交流]
【求助/交流】如何设计兼并引物已有3人参与
|
||
|
各位大虾： 小弟想根据不同昆虫中表达相同蛋白的DNA序列设计一对兼并引物，已知的这些目的基因有些知道全长，有些只知道一部分序列，我怎样去根据这些已知的信息去设计引物，然后再特异扩增另一种昆虫体内的相似的目的基因呢？ 由于我是新手，很多东西不懂，请各位多多指教，谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有241人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
zhlzuo(金币+1):我要做的是前者，多谢指教。 2010-04-01 21:22
|
你的目的是什么，获得某个在其他昆虫中已知而在你研究的昆虫中未知的基因的全长？还是研究某个基因在不同昆虫中的表达？ 如果是前者，那么就设计RACE同源引物（设计方法同后面，只是引物长度和退火温度根据试剂盒还有特殊要求），然后PCR克隆测序 如果是后者，就设计一对同源引物，测序后，重新设计RT-realtime PCR，进行定量分析。 具体简并引物的设计方法，你要看比对结果，比如你的昆虫和已知该基因的昆虫基因相似度很高，在90%左右了，那么就可以根据比对结果在保守区直接设计引物，不需要简并碱基，如果相似度相对低，那么你就根据比对结果在保守区设计简并引物，简并碱基是根据不同昆虫比对的结果设计的，还可以根据密码子的偏好，降低简并度，一般来说简并度不能超过16，如果太高，可以用黄嘌呤代替简并碱基，因为它可以很好的跟四种碱基配对 [ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-31 at 09:21 ] |
2楼2010-03-31 09:19:56
3楼2010-03-31 09:43:02
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
4楼2010-03-31 11:27:39
hc1027
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1414.3
- 散金: 107
- 红花: 4
- 帖子: 903
- 在线: 311.3小时
- 虫号: 726621
- 注册: 2009-03-19
- 专业: 环境微生物学
5楼2010-04-05 12:04:25
6楼2010-04-05 13:43:04
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
7楼2010-04-05 19:04:33