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w.king124

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】提取pET32-a(+)质粒,量很低是菌株退化导致拷贝数下降吗(急)

如题,手提质粒pET32-a+(300ml细菌培养液,12h培养),提了几次都是产量很低,但是同时提的其他质粒量却很大,说明提取手法应该没有什么问题(提过很多次,手艺很成熟,),那么现在问题是:这种情况是不是由于菌株退化导致的质粒拷贝数下降???
如果我用提取得到的质粒转化DH5阿尔法感受态细胞,得到的菌会恢复高拷贝吗?
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

你是在什么宿主菌中提得质粒啊?这个会有影响的吧!
2楼2010-03-30 21:28:03
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ilaveu

木虫 (著名写手)


sutao1979(金币+1): 2010-03-30 21:40
按照你说的重新转化DH5a,估计应该可以解决
3楼2010-03-30 21:31:59
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w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by wordsworth3180 at 2010-03-30 21:28:03:
你是在什么宿主菌中提得质粒啊?这个会有影响的吧!

这个菌株是别的实验室赠的,应该也是在DH5阿尔法吧
4楼2010-03-30 21:36:07
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w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by ilaveu at 2010-03-30 21:31:59:
按照你说的重新转化DH5a,估计应该可以解决

本来可以做的,但是现在时间比较紧,就是不想浪费时间,想请遇到过这种情况的介绍一下经验,节省点时间,呵呵
5楼2010-03-30 21:42:19
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w.king124

金虫 (正式写手)

6楼2010-03-31 08:51:44
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angel2536

金虫 (著名写手)

w.king124(金币+2):谢谢! 2010-03-31 11:48
不知你以前在该菌种中提过没有?
感觉不是你的菌液活性不好,就是质粒本身在这种感受态中低拷贝。
我也遇到过这种情况,我就是属于后面那种情况
7楼2010-03-31 09:56:21
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w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by angel2536 at 2010-03-31 09:56:21:
不知你以前在该菌种中提过没有?
感觉不是你的菌液活性不好,就是质粒本身在这种感受态中低拷贝。
我也遇到过这种情况,我就是属于后面那种情况

我以前的质粒都在DH5阿尔法里,比如连接目的基因的pMD18质粒等拷贝数就很高
你是怎样解决这个问题的呢?谢谢了
8楼2010-03-31 11:52:01
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angel2536

金虫 (著名写手)

w.king124(金币+2): 2010-03-31 19:30
w.king124(金币+1):谢谢,我的菌液都是新鲜的,应该没有问题,那就先试试DH5a吧 2010-03-31 19:32
引用回帖:
Originally posted by w.king124 at 2010-03-31 11:52:01:


我以前的质粒都在DH5阿尔法里,比如连接目的基因的pMD18质粒等拷贝数就很高
你是怎样解决这个问题的呢?谢谢了

我提取的质粒是pCDNA3.1-EGFP,它在JM109中表达很低,摇菌还很慢。而换到Top10中,在他中的拷贝数就很高,提出的质粒浓度就非常高。
没用过DH5a,可以先查下他的特性。如果你提取的都是用保存菌液摇菌的,那不妨试下重新转化了,没有更好的方法。祝好运。。
9楼2010-03-31 14:58:13
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