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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提取pET32-a（+）质粒，量很低是菌株退化导致拷贝数下降吗（急）
汕头大学海洋科学接受调剂
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 w.king124 的 5 个金币

w.king124

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】提取pET32-a（+）质粒，量很低是菌株退化导致拷贝数下降吗（急）

如题，手提质粒pET32-a+（300ml细菌培养液，12h培养），提了几次都是产量很低，但是同时提的其他质粒量却很大，说明提取手法应该没有什么问题（提过很多次，手艺很成熟，），那么现在问题是：这种情况是不是由于菌株退化导致的质粒拷贝数下降？？？
如果我用提取得到的质粒转化DH5阿尔法感受态细胞，得到的菌会恢复高拷贝吗？
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1楼 2010-03-30 21:13:54
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
你是在什么宿主菌中提得质粒啊？这个会有影响的吧！
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2楼2010-03-30 21:28:03
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
sutao1979(金币+1): 2010-03-30 21:40
按照你说的重新转化DH5a，估计应该可以解决
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3楼2010-03-30 21:31:59
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wordsworth3180 at 2010-03-30 21:28:03:
你是在什么宿主菌中提得质粒啊？这个会有影响的吧！

这个菌株是别的实验室赠的，应该也是在DH5阿尔法吧
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4楼2010-03-30 21:36:07
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ilaveu at 2010-03-30 21:31:59:
按照你说的重新转化DH5a，估计应该可以解决

本来可以做的，但是现在时间比较紧，就是不想浪费时间，想请遇到过这种情况的介绍一下经验，节省点时间，呵呵
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5楼2010-03-30 21:42:19
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w.king124

金虫 (正式写手)
6楼2010-03-31 08:51:44
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angel2536

金虫 (著名写手)
w.king124(金币+2):谢谢！ 2010-03-31 11:48
不知你以前在该菌种中提过没有？
感觉不是你的菌液活性不好，就是质粒本身在这种感受态中低拷贝。
我也遇到过这种情况，我就是属于后面那种情况
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7楼2010-03-31 09:56:21
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by angel2536 at 2010-03-31 09:56:21:
不知你以前在该菌种中提过没有？
感觉不是你的菌液活性不好，就是质粒本身在这种感受态中低拷贝。
我也遇到过这种情况，我就是属于后面那种情况

我以前的质粒都在DH5阿尔法里，比如连接目的基因的pMD18质粒等拷贝数就很高
你是怎样解决这个问题的呢？谢谢了
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8楼2010-03-31 11:52:01
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angel2536

金虫 (著名写手)
w.king124(金币+2): 2010-03-31 19:30
w.king124(金币+1):谢谢，我的菌液都是新鲜的，应该没有问题，那就先试试DH5a吧 2010-03-31 19:32
引用回帖:
Originally posted by w.king124 at 2010-03-31 11:52:01:


我以前的质粒都在DH5阿尔法里，比如连接目的基因的pMD18质粒等拷贝数就很高
你是怎样解决这个问题的呢？谢谢了

我提取的质粒是pCDNA3.1-EGFP，它在JM109中表达很低，摇菌还很慢。而换到Top10中，在他中的拷贝数就很高，提出的质粒浓度就非常高。
没用过DH5a，可以先查下他的特性。如果你提取的都是用保存菌液摇菌的，那不妨试下重新转化了，没有更好的方法。祝好运。。
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9楼2010-03-31 14:58:13
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