应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提取pET32-a（+）质粒，量很低是菌株退化导致拷贝数下降吗（急）
91/1返回列表
查看: 933  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 w.king124 的 5 个金币

w.king124

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】提取pET32-a（+）质粒，量很低是菌株退化导致拷贝数下降吗（急）

如题，手提质粒pET32-a+（300ml细菌培养液，12h培养），提了几次都是产量很低，但是同时提的其他质粒量却很大，说明提取手法应该没有什么问题（提过很多次，手艺很成熟，），那么现在问题是：这种情况是不是由于菌株退化导致的质粒拷贝数下降？？？
如果我用提取得到的质粒转化DH5阿尔法感受态细胞，得到的菌会恢复高拷贝吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-30 21:13:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)
你是在什么宿主菌中提得质粒啊？这个会有影响的吧！
赞一下 回复此楼
2楼2010-03-30 21:28:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ilaveu

木虫 (著名写手)
★
sutao1979(金币+1): 2010-03-30 21:40
按照你说的重新转化DH5a，估计应该可以解决
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-03-30 21:31:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wordsworth3180 at 2010-03-30 21:28:03:
你是在什么宿主菌中提得质粒啊？这个会有影响的吧！

这个菌株是别的实验室赠的，应该也是在DH5阿尔法吧
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-30 21:36:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ilaveu at 2010-03-30 21:31:59:
按照你说的重新转化DH5a，估计应该可以解决

本来可以做的，但是现在时间比较紧，就是不想浪费时间，想请遇到过这种情况的介绍一下经验，节省点时间，呵呵
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-30 21:42:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)
6楼2010-03-31 08:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

angel2536

金虫 (著名写手)
w.king124(金币+2):谢谢！ 2010-03-31 11:48
不知你以前在该菌种中提过没有？
感觉不是你的菌液活性不好，就是质粒本身在这种感受态中低拷贝。
我也遇到过这种情况，我就是属于后面那种情况
赞一下 回复此楼
7楼2010-03-31 09:56:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by angel2536 at 2010-03-31 09:56:21:
不知你以前在该菌种中提过没有？
感觉不是你的菌液活性不好，就是质粒本身在这种感受态中低拷贝。
我也遇到过这种情况，我就是属于后面那种情况

我以前的质粒都在DH5阿尔法里，比如连接目的基因的pMD18质粒等拷贝数就很高
你是怎样解决这个问题的呢？谢谢了
赞一下 回复此楼
8楼2010-03-31 11:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

angel2536

金虫 (著名写手)
w.king124(金币+2): 2010-03-31 19:30
w.king124(金币+1):谢谢，我的菌液都是新鲜的，应该没有问题，那就先试试DH5a吧 2010-03-31 19:32
引用回帖:
Originally posted by w.king124 at 2010-03-31 11:52:01:


我以前的质粒都在DH5阿尔法里，比如连接目的基因的pMD18质粒等拷贝数就很高
你是怎样解决这个问题的呢？谢谢了

我提取的质粒是pCDNA3.1-EGFP，它在JM109中表达很低，摇菌还很慢。而换到Top10中，在他中的拷贝数就很高，提出的质粒浓度就非常高。
没用过DH5a，可以先查下他的特性。如果你提取的都是用保存菌液摇菌的，那不妨试下重新转化了，没有更好的方法。祝好运。。
赞一下 回复此楼
9楼2010-03-31 14:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 w.king124 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-21 6/300 2026-03-22 11:35 by plum李子
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +4 2117205181 2026-03-21 5/250 2026-03-22 11:30 by 杨杨杨紫
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +7 困于星晨 2026-03-17 9/450 2026-03-20 17:38 by 无懈可击111
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭