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含笑天天

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助】纳豆激酶活性测定 已有9人参与

各位高手大家好,我检测纳豆激酶活性是用纤维蛋白平办法:
    10 ml纤维蛋白原溶液(1.2 mg/ml 纤维蛋白原,50 mM 巴比妥钠,90 mM NaCl,1.7 mM CaCl2,0.7 mM MgCl2,pH 7.75),10 ml 琼脂糖溶液(0.8%),分别在55°C水浴中温浴,向琼脂糖溶液中加入1 BP凝血酶溶液(溶在10μl巴比妥钠)。纤维蛋白原溶液和琼脂糖溶液在100 mm平皿中混合于室温放置1 h形成纤维蛋白块,打孔,点样10 μl酶液,37温浴18 h,以尿激酶(100、 80、 60、 40、 20 U/ml)为标准制作标准曲线,计算纳豆激酶的酶活。
     问题出现在尿激酶标准曲线的制作上,上次做直接点尿激酶都没有溶解圈。后来发现尿激酶通过作用于纤维蛋白溶酶原从而发挥作用,为什么我看到的文献上,在做纤维蛋白平板的时候都没提到纤维蛋白溶酶原溶液那??不知道大家做的时候纤维蛋白溶酶原是什么时候加的?请高手赐教
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虫虫虫虫
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释天1

铜虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by dongchao at 2010-03-26 09:32:24
不用纤维蛋白溶酶原,主要是因为纤维蛋白和凝血酶加入的技巧,形成的板子要是乳白色,里面是纤维蛋白浑浊,不是透明的,要多操作几次.我已经搞了4年了,希望多交流

怎么加入啊?我也在做纤维蛋白平板啊 ,可是没效果啊 ,能不能说说你的经验啊 ?谢谢,急急急啊
18楼2014-04-22 09:04:58
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leewolf

金虫 (小有名气)

我也准备正准备坐这个呢,我看的很多文献和你说的这个方法是差不多的,都是参考一篇1952的文献(作者:Astrup T)的,但是没下载到原文。这个问题也是我困惑的,希望高手指点。。。
2楼2010-03-25 23:52:03
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dongchao

金虫 (小有名气)

纳豆激酶的测定

含笑天天(金币+2): 2010-03-27 14:14
含笑天天(金币+2): 2010-03-27 14:15
不用纤维蛋白溶酶原,主要是因为纤维蛋白和凝血酶加入的技巧,形成的板子要是乳白色,里面是纤维蛋白浑浊,不是透明的,要多操作几次.我已经搞了4年了,希望多交流
3楼2010-03-26 09:32:24
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leewolf

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dongchao at 2010-03-26 09:32:24:
不用纤维蛋白溶酶原,主要是因为纤维蛋白和凝血酶加入的技巧,形成的板子要是乳白色,里面是纤维蛋白浑浊,不是透明的,要多操作几次.我已经搞了4年了,希望多交流

能不能给总结下这些技巧,十分感谢
4楼2010-03-26 12:33:40
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