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zyj053

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA银染

我用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA,这是银染之后的条带。我所用的银染方法是:凝胶浸泡于10%冰醋酸中固定20min,以0.1%AgNO3溶液(含0.056%甲醛)浸泡30min,然后将凝胶置入预冷(4℃-10℃)的Na2CO3显影液中显色5-15min后,加入10%冰醋酸定影5min。但是我在显影液里放了30min,还是没有看到条带,放了一夜第二天早上才有东西,照片是我银染后,第二天拍的。请大虾们帮我看看那里出问题啦!急用,非常感谢!!!!!!!!!

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lansha8331

无虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-25 21:11:35:

你的用的是碳酸钠显色法?这个方法不应该是五分钟就够了,你用的是氢氧化钠的方法吧

恩,对,之前跑小胶用的是强碱法,五分钟一步,非变性胶。变性胶我也跑过,用的碳酸钠弱碱法,每步就得半小时了。但是我试验也跟楼主出现白板,条带弱的时候是强碱法的时候呵呵
15楼2010-03-29 11:33:49
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查看全部 19 个回答

cyjwx123

铁虫 (小有名气)


zyj053(金币+1):谢谢参与
zyj053(金币+1): 2010-03-24 19:57
我染色糖基化蛋白质的时候也出现了同样的问题,按照理论来讲银染过程比其他染色的方法都要复杂,然而敏感程度应该很高,但是结果却发现不是很敏感,我建议你换下试剂吧,比如用公司生产的试剂盒试下~
看的开才是真本事~
2楼2010-03-24 18:20:31
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zyj053

金虫 (初入文坛)

你说用什么试剂盒?染色试剂盒?
3楼2010-03-24 19:59:42
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


zyj053(金币+1):谢谢参与
怀疑你的硝酸银浓度有问题,你配制的是0.1%的吗?
另外我记得你这种染色配方好像在显色液里也加有甲醛,千分之三的浓度
4楼2010-03-24 20:13:58
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