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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA银染
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zyj053

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA银染

我用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA，这是银染之后的条带。我所用的银染方法是：凝胶浸泡于10%冰醋酸中固定20min，以0.1%AgNO3溶液（含0.056%甲醛）浸泡30min，然后将凝胶置入预冷（4℃-10℃）的Na2CO3显影液中显色5-15min后，加入10%冰醋酸定影5min。但是我在显影液里放了30min，还是没有看到条带，放了一夜第二天早上才有东西，照片是我银染后，第二天拍的。请大虾们帮我看看那里出问题啦！急用，非常感谢！！！！！！！！！

[img]http://[/img]
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1楼 2010-03-24 17:55:06
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cyjwx123

铁虫 (小有名气)
★
zyj053(金币+1):谢谢参与
zyj053(金币+1): 2010-03-24 19:57
我染色糖基化蛋白质的时候也出现了同样的问题，按照理论来讲银染过程比其他染色的方法都要复杂，然而敏感程度应该很高，但是结果却发现不是很敏感，我建议你换下试剂吧，比如用公司生产的试剂盒试下~
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看的开才是真本事~
2楼2010-03-24 18:20:31
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zyj053

金虫 (初入文坛)
你说用什么试剂盒？染色试剂盒？
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3楼2010-03-24 19:59:42
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
zyj053(金币+1):谢谢参与
怀疑你的硝酸银浓度有问题，你配制的是0.1%的吗？
另外我记得你这种染色配方好像在显色液里也加有甲醛，千分之三的浓度
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4楼2010-03-24 20:13:58
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zyj053

金虫 (初入文坛)
是啊 我新买的硝酸银 按体积比配的 100ml里0.1g硝酸银 用之前加的甲醛
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5楼2010-03-25 10:13:05
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lansha8331

无虫 (小有名气)
★
zyj053(金币+1):谢谢参与
我筛选分子标记的时候做过，固定，染色，显色每步基本都是五分钟搞定，很快的，条带也很黑。你这也确实有点慢，，，估计是硝酸银的问题吧，我的放久了也很难染出来。
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6楼2010-03-25 13:50:43
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
zyj053(金币+1):谢谢参与
提高硝酸银和甲醛的浓度

硝酸银用几次就不行了
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7楼2010-03-25 18:01:25
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
zyj053(金币+1):谢谢参与
每次A溶液换成B溶液都要用水洗
洗个3×5min
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8楼2010-03-25 18:04:27
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暗星

银虫 (小有名气)
★
zyj053(金币+1):谢谢参与
我觉得是你的银染有点问题，我们一般都是在乙酸加一些乙醇，而且你的甲醛不要和硝酸银一起加，等到银染完了，有蒸馏水洗后，和氢氧化钠一起加进去！
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9楼2010-03-25 20:23:21
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lansha8331 at 2010-03-25 13:50:43:
我筛选分子标记的时候做过，固定，染色，显色每步基本都是五分钟搞定，很快的，条带也很黑。你这也确实有点慢，，，估计是硝酸银的问题吧，我的放久了也很难染出来。

你的用的是碳酸钠显色法？这个方法不应该是五分钟就够了，你用的是氢氧化钠的方法吧
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10楼2010-03-25 21:11:35
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