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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA银染
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zyj053

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA银染

我用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA，这是银染之后的条带。我所用的银染方法是：凝胶浸泡于10%冰醋酸中固定20min，以0.1%AgNO3溶液（含0.056%甲醛）浸泡30min，然后将凝胶置入预冷（4℃-10℃）的Na2CO3显影液中显色5-15min后，加入10%冰醋酸定影5min。但是我在显影液里放了30min，还是没有看到条带，放了一夜第二天早上才有东西，照片是我银染后，第二天拍的。请大虾们帮我看看那里出问题啦！急用，非常感谢！！！！！！！！！

[img]http://[/img]
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1楼 2010-03-24 17:55:06
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 暗星 at 2010-03-25 20:23:21:
我觉得是你的银染有点问题，我们一般都是在乙酸加一些乙醇，而且你的甲醛不要和硝酸银一起加，等到银染完了，有蒸馏水洗后，和氢氧化钠一起加进去！

你用的方法和楼主的也不一样，你用的是氢氧化钠显色法，他用的是碳酸钠，他的这种方法，比较慢，但是背景浅，灵敏度高，你的方法适合快速检测
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11楼2010-03-25 21:13:04
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cyjwx123

铁虫 (小有名气)
★
zyj053(金币+1):谢谢参与
zyj053(金币+1): 2010-03-24 19:57
我染色糖基化蛋白质的时候也出现了同样的问题，按照理论来讲银染过程比其他染色的方法都要复杂，然而敏感程度应该很高，但是结果却发现不是很敏感，我建议你换下试剂吧，比如用公司生产的试剂盒试下~
赞一下(1人) 回复此楼
看的开才是真本事~
2楼2010-03-24 18:20:31
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zyj053

金虫 (初入文坛)
你说用什么试剂盒？染色试剂盒？
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3楼2010-03-24 19:59:42
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
zyj053(金币+1):谢谢参与
怀疑你的硝酸银浓度有问题，你配制的是0.1%的吗？
另外我记得你这种染色配方好像在显色液里也加有甲醛，千分之三的浓度
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4楼2010-03-24 20:13:58
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