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liyang107

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】GUS染色具体步骤

如题,现在准备做GUS标记基因检测,请教大家,具体实验步骤,越详尽越好,谢谢大家的帮助!
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

liyang107(金币+5): 2010-03-30 19:43
你看看这个protocal吧,挺全的(包括GUS组织化学检测和荧光活性检测)
http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=8595394gromjo3hamkhb552
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-03-25 08:36:54
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wangxiaoguo

木虫 (正式写手)

liyang107(金币+5): 2010-03-30 19:43
GUS基因检测
仪器设备:恒温箱、超净工作台
器具:1.5ml的塑料管、镊子、解剖刀等
材料:转化的愈伤组织
试剂及其配制:
50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0):A液:取NaH2PO4.2H2O 3.12g溶于蒸馏水,定溶至100ml。 B液:取Na2HPO4.12H2O 7.17g溶于蒸馏水,定溶100ml。取A液39ml与B 液61ml混合,定容至400ml,调PH至7.0。

50mmol/L铁氰化钾母液:称3.295g,用蒸馏水定容至200ml

50mmol/l亚铁氰化钾母液:称4.224g ,用蒸馏水定容至200ml。


0.5mol/l EDTA母液(pH8.0):
        药品             分子量        100ml           500ml
        EDTA Na2 2H2O    372.24        18.6g            93.06g
        双蒸H2O                        80ml            400ml
        用NaOH调PH至8.0             6g              10g
        DdH2O定容至                   100ml           500ml

GUS检测液的配制:甲醇、Gluc、DMF
100mgGluc,先溶于1ml的DMF。取80ml 50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0),加入1ml 50mmol/L铁氰化钾、1ml 50mmol/L亚铁氰化钾和2ml 0.5mol/l EDTA(PH 8.0),再加入已溶解的Gluc,再加20ml的甲醇,混匀。(配制方法参考《现代植物生理学实验指南》p348)
将配好的GUS检测液分装于1.5ml的塑料管中(1ml/管,1组1管),-20°C保存备用。


具体要看你检测什么基因了!!
202010
2楼2010-03-23 00:18:05
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虫虫博士

新虫 (小有名气)

只是转基因阳性苗的检测的话,取一小段根,放入GUS染液中,染过夜-3天,有些基因表达很弱,一开始没有染出来也不要丢掉,。
3楼2010-03-24 11:11:44
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