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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pet28a
汕头大学海洋科学接受调剂
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arniekyo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pet28a

我现在构建一个原核表达载体，以pET28-a为骨架，用Nde1酶切过后，由于一些原因不得不更换Nco1酶切位点，由于时间紧迫，想直接把Nde1酶切的回收产物再用NCO1进行酶切，因为这两个酶切位点很近，请教大家这样可以么
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1楼 2010-03-18 10:15:33
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gaozx123

金虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:26
你做单酶切吗？看一下它的图谱，看你的用途了。假如是单酶切构建重组质粒的话，你得看酶切过后的黏性末端是否还可以连上。

[ Last edited by gaozx123 on 2010-3-18 at 10:27 ]
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2楼2010-03-18 10:22:08
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arniekyo

铜虫 (小有名气)
我现在的pet2是经过nde1和xho1双酶切的回收产物，不知道这样可以么
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3楼2010-03-18 10:24:01
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
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你的目的片段有哪个酶切位点啊？
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4楼2010-03-18 10:28:17
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:26
具体有几个bp啊，应该只要能够满足NCO1保护碱基数目就应该能行,所以只要不低于4bp就能行
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-03-18 10:35:22
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arniekyo

铜虫 (小有名气)
差不多有60bp
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6楼2010-03-18 10:55:20
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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Originally posted by arniekyo at 2010-03-18 10:55:20:
差不多有60bp

那等没有问题，做吧！
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-03-18 10:56:47
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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Originally posted by fungixx at 2010-03-18 10:56:47:

那等没有问题，做吧！

上个打错了 ，那肯定没有问题，做吧
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
8楼2010-03-18 10:57:26
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arniekyo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-03-18 10:56:47:

那等没有问题，做吧！

做上了，谢谢啊，等出结果再看
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9楼2010-03-18 15:38:58
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★
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NdeI 和NotI 之间有一个pelB信号肽吧。如果LZ不是要表达到胞外或者有自身的信号肽的话，应该可以。
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10楼2010-03-18 16:27:18
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