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arniekyo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pet28a

我现在构建一个原核表达载体,以pET28-a为骨架,用Nde1酶切过后,由于一些原因不得不更换Nco1酶切位点,由于时间紧迫,想直接把Nde1酶切的回收产物再用NCO1进行酶切,因为这两个酶切位点很近,请教大家这样可以么
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gaozx123

金虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:26
你做单酶切吗?看一下它的图谱,看你的用途了。假如是单酶切构建重组质粒的话,你得看酶切过后的黏性末端是否还可以连上。

[ Last edited by gaozx123 on 2010-3-18 at 10:27 ]
2楼2010-03-18 10:22:08
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arniekyo

铜虫 (小有名气)

我现在的pet2是经过nde1和xho1双酶切的回收产物,不知道这样可以么
3楼2010-03-18 10:24:01
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gaozx123

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的目的片段有哪个酶切位点啊?
4楼2010-03-18 10:28:17
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:26
具体有几个bp啊,应该只要能够满足NCO1保护碱基数目就应该能行,所以只要不低于4bp就能行
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-03-18 10:35:22
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arniekyo

铜虫 (小有名气)

差不多有60bp
6楼2010-03-18 10:55:20
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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引用回帖:
Originally posted by arniekyo at 2010-03-18 10:55:20:
差不多有60bp

那等没有问题,做吧!
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-03-18 10:56:47
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-03-18 10:56:47:

那等没有问题,做吧!

上个打错了 ,那肯定没有问题,做吧
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
8楼2010-03-18 10:57:26
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arniekyo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-03-18 10:56:47:

那等没有问题,做吧!

做上了,谢谢啊,等出结果再看
9楼2010-03-18 15:38:58
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Charlie1331

金虫 (正式写手)


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NdeI 和NotI 之间有一个pelB信号肽吧。如果LZ不是要表达到胞外或者有自身的信号肽的话,应该可以。
10楼2010-03-18 16:27:18
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