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纳米小生
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[交流]
【求助/交流】Hela细胞培养遇到的一些问题
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各位大侠: 近期在培养Hela细胞, 因生长不均匀,用胰酶消化以后再培养,可是每次消化后都会有大面积死亡,只留下少数细胞活着,传代时也出现这样的问题.而养的正常细胞没有出现这类问题,是怎么回事? 确定没有消化过度. |
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2楼2010-03-18 09:01:19
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anjw_00
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1949stone(金币+2): 2010-03-18 13:28
1949stone(金币+2): 2010-03-18 13:28
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肿瘤细胞培养也存在传代次数问题的，而且你是用哪里来的细胞复苏的呢？同批冻存的细胞有没有这类问题 在DXY找到一些东西，或许对你有帮助 肿瘤细胞培养两个月应该不会有问题，但培养的不好就另说了，细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。要及时做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡，故传代应越早越好。传代过晚（已有中毒迹象）能影响下一代细胞的机能状态。在这种情况下，虽进行了传代，因细胞已受损，需要恢复，至少还要再传1～2两代，通过换液淘汰掉死细胞和使受损轻微的细胞得以恢复后，才能再用。否则影响实验结果，而且我们连续两次培养太密的细胞就不要了。传代时间要你自己掌握哦，因为不同细胞的倍增时间可能不同，你接种的密度也可能不同，所以什么时候传代你也可以自己估计啊，开始培养细胞时，每天计数，估计倍增时间，计算以你接种的密度多久到对数生长期，一般保持在对数期内传代，一周两次差不多了。 [ Last edited by anjw_00 on 2010-3-18 at 11:42 ] |
6楼2010-03-18 10:47:42
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