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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Hela细胞培养遇到的一些问题
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骑着蜗牛追火箭

木虫 (著名写手)

纳米小生

[交流] 【求助/交流】Hela细胞培养遇到的一些问题

各位大侠:
       近期在培养Hela细胞, 因生长不均匀,用胰酶消化以后再培养,可是每次消化后都会有大面积死亡,只留下少数细胞活着,传代时也出现这样的问题.而养的正常细胞没有出现这类问题,是怎么回事? 确定没有消化过度.
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1楼 2010-03-18 08:41:48
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anjw_00

铁杆木虫 (知名作家)
骑着蜗牛追火箭(金币+3):Hela是五六十年前传下来的癌细胞,不存在代数多的问题 2010-03-18 10:25
你的细胞是不是传代次数太多了啊
要不再买瓶新的？
你们实验室里有没有人和你养同样的细胞呢？有没有这种问题？
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一切不以下雪为目的的大风和降温都是耍流氓
2楼2010-03-18 09:01:19
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hug_wind

新虫 (初入文坛)
★
骑着蜗牛追火箭(金币+3):买回来没多久,才传一次,Hela是癌细胞.消化上皮细胞都没事,很正常.还有少数活着,培养基没变浑浊,应该没染菌,而且有做无菌测试. 2010-03-18 10:27
1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:28
1.传代次数过多造成细胞老化，细胞可能会变圆或发生死亡。
2.胰酶消化过度 或是胰酶浓度太高也会造成细胞发生死亡。
3.检查细胞是否发生污染。建议重新新鲜配置培养基及胰酶进行操作。
4.若以上情况都不是建议重新复苏新的细胞。
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3楼2010-03-18 09:12:25
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
骑着蜗牛追火箭(金币+1):接种太少了,长得不均匀.这个就慢一点,原则上不影响 2010-03-18 10:28
怎么会生长不均匀呢，是不是支原体污染了？
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4楼2010-03-18 10:16:01
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
骑着蜗牛追火箭(金币+5):24小时以后贴壁很少.消化时只有极少部分漂起就终止了,消化过度了吗?我是新手,请指教! 2010-03-18 11:08
1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:28
请问楼主是如何判断细胞死亡的，是消化后24小时贴壁细胞很少，漂了好多；还是24小时后观察细胞少了很多？如果是前者的话，可能确实是消化过了，与温度存在很大关系。后者的话，本来细胞就稀，离心的话损失一些，就没有多少了。
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5楼2010-03-18 10:37:34
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anjw_00

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 2010-03-18 13:28
肿瘤细胞培养也存在传代次数问题的，而且你是用哪里来的细胞复苏的呢？同批冻存的细胞有没有这类问题
在DXY找到一些东西，或许对你有帮助

肿瘤细胞培养两个月应该不会有问题，但培养的不好就另说了，细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。要及时做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡，故传代应越早越好。传代过晚（已有中毒迹象）能影响下一代细胞的机能状态。在这种情况下，虽进行了传代，因细胞已受损，需要恢复，至少还要再传1～2两代，通过换液淘汰掉死细胞和使受损轻微的细胞得以恢复后，才能再用。否则影响实验结果，而且我们连续两次培养太密的细胞就不要了。传代时间要你自己掌握哦，因为不同细胞的倍增时间可能不同，你接种的密度也可能不同，所以什么时候传代你也可以自己估计啊，开始培养细胞时，每天计数，估计倍增时间，计算以你接种的密度多久到对数生长期，一般保持在对数期内传代，一周两次差不多了。

[ Last edited by anjw_00 on 2010-3-18 at 11:42 ]
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一切不以下雪为目的的大风和降温都是耍流氓
6楼2010-03-18 10:47:42
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yqhc

金虫 (小有名气)
骑着蜗牛追火箭(金币+2):如果污染,应该是浑浊的,而且不会有少量细胞活着. 2010-03-18 11:08
应该很好养的，是不是污染了，
换一下培养基试一试。
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7楼2010-03-18 10:53:48
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lililxmc

木虫 (正式写手)
骑着蜗牛追火箭(金币+2):谢谢 2010-03-18 11:09
用多聚赖氨酸包被培养瓶或培养皿试试看，有助于细胞贴壁，如果不行那就排除了外界环境因素，再加上培养基如果没问题的话，那估计就是你们细胞本身出问题了。
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8楼2010-03-18 11:01:53
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
骑着蜗牛追火箭(金币+3):谢谢 2010-03-18 11:35
1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:28
像Hela细胞一般不会那么容易死的，主要还是与你的接种量有关，也就是传代时的细胞密度太低了，一般占培养瓶底百分之八九十的话传代比较好。消化，37°，1分钟就ok，室温的话看情况，2，3分钟就ok了。可以镜下观察一下，看细胞之间是否分离，出现脱落的话就有点过了，会影响细胞贴壁。
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9楼2010-03-18 11:27:48
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