应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Hela细胞培养遇到的一些问题
91/1返回列表
查看: 1267  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

骑着蜗牛追火箭

木虫 (著名写手)

纳米小生

[交流] 【求助/交流】Hela细胞培养遇到的一些问题

各位大侠:
       近期在培养Hela细胞, 因生长不均匀,用胰酶消化以后再培养,可是每次消化后都会有大面积死亡,只留下少数细胞活着,传代时也出现这样的问题.而养的正常细胞没有出现这类问题,是怎么回事? 确定没有消化过度.
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-18 08:41:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anjw_00

铁杆木虫 (知名作家)
骑着蜗牛追火箭(金币+3):Hela是五六十年前传下来的癌细胞,不存在代数多的问题 2010-03-18 10:25
你的细胞是不是传代次数太多了啊
要不再买瓶新的？
你们实验室里有没有人和你养同样的细胞呢？有没有这种问题？
赞一下 回复此楼
一切不以下雪为目的的大风和降温都是耍流氓
2楼2010-03-18 09:01:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hug_wind

新虫 (初入文坛)
★
骑着蜗牛追火箭(金币+3):买回来没多久,才传一次,Hela是癌细胞.消化上皮细胞都没事,很正常.还有少数活着,培养基没变浑浊,应该没染菌,而且有做无菌测试. 2010-03-18 10:27
1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:28
1.传代次数过多造成细胞老化，细胞可能会变圆或发生死亡。
2.胰酶消化过度 或是胰酶浓度太高也会造成细胞发生死亡。
3.检查细胞是否发生污染。建议重新新鲜配置培养基及胰酶进行操作。
4.若以上情况都不是建议重新复苏新的细胞。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-03-18 09:12:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
骑着蜗牛追火箭(金币+1):接种太少了,长得不均匀.这个就慢一点,原则上不影响 2010-03-18 10:28
怎么会生长不均匀呢，是不是支原体污染了？
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-18 10:16:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaozx123

金虫 (小有名气)
★
骑着蜗牛追火箭(金币+5):24小时以后贴壁很少.消化时只有极少部分漂起就终止了,消化过度了吗?我是新手,请指教! 2010-03-18 11:08
1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:28
请问楼主是如何判断细胞死亡的，是消化后24小时贴壁细胞很少，漂了好多；还是24小时后观察细胞少了很多？如果是前者的话，可能确实是消化过了，与温度存在很大关系。后者的话，本来细胞就稀，离心的话损失一些，就没有多少了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-03-18 10:37:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anjw_00

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 2010-03-18 13:28
肿瘤细胞培养也存在传代次数问题的，而且你是用哪里来的细胞复苏的呢？同批冻存的细胞有没有这类问题
在DXY找到一些东西，或许对你有帮助

肿瘤细胞培养两个月应该不会有问题，但培养的不好就另说了，细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。要及时做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡，故传代应越早越好。传代过晚（已有中毒迹象）能影响下一代细胞的机能状态。在这种情况下，虽进行了传代，因细胞已受损，需要恢复，至少还要再传1～2两代，通过换液淘汰掉死细胞和使受损轻微的细胞得以恢复后，才能再用。否则影响实验结果，而且我们连续两次培养太密的细胞就不要了。传代时间要你自己掌握哦，因为不同细胞的倍增时间可能不同，你接种的密度也可能不同，所以什么时候传代你也可以自己估计啊，开始培养细胞时，每天计数，估计倍增时间，计算以你接种的密度多久到对数生长期，一般保持在对数期内传代，一周两次差不多了。

[ Last edited by anjw_00 on 2010-3-18 at 11:42 ]
赞一下(1人) 回复此楼
一切不以下雪为目的的大风和降温都是耍流氓
6楼2010-03-18 10:47:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqhc

金虫 (小有名气)
骑着蜗牛追火箭(金币+2):如果污染,应该是浑浊的,而且不会有少量细胞活着. 2010-03-18 11:08
应该很好养的，是不是污染了，
换一下培养基试一试。
赞一下 回复此楼
7楼2010-03-18 10:53:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lililxmc

木虫 (正式写手)
骑着蜗牛追火箭(金币+2):谢谢 2010-03-18 11:09
用多聚赖氨酸包被培养瓶或培养皿试试看，有助于细胞贴壁，如果不行那就排除了外界环境因素，再加上培养基如果没问题的话，那估计就是你们细胞本身出问题了。
赞一下 回复此楼
8楼2010-03-18 11:01:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaozx123

金虫 (小有名气)
★
骑着蜗牛追火箭(金币+3):谢谢 2010-03-18 11:35
1949stone(金币+1): 2010-03-18 13:28
像Hela细胞一般不会那么容易死的，主要还是与你的接种量有关，也就是传代时的细胞密度太低了，一般占培养瓶底百分之八九十的话传代比较好。消化，37°，1分钟就ok，室温的话看情况，2，3分钟就ok了。可以镜下观察一下，看细胞之间是否分离，出现脱落的话就有点过了，会影响细胞贴壁。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-03-18 11:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 骑着蜗牛追火箭 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 11/550 2026-08-23 02:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:52 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖？ +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭