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段家一凡

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】提取瘤胃宏基因组DNA,如何避免提到植物的DNA 已有1人参与

如题,我想用直接提取法提取瘤胃未培养微生物的宏基因组DNA,用于测序,那么常规提取的话,应该会混有很多植物的DNA,这样宏基因组测序的会测到很多植物的基因组DNA,造成不必要的浪费和测序结果分析的困难。间接提取法(先分离细胞)也是不行的,因为瘤胃纤维素降解微生物应该和植物细胞壁紧密结合,请问怎么可以选择性的提取到微生物的DNA。
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段家一凡

木虫 (正式写手)

有没有做宏基因组测序的虫子,请给点意见。
7楼2010-03-16 11:28:29
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查看全部 19 个回答

段家一凡

木虫 (正式写手)

顶一下,请提供一个思路
2楼2010-03-15 21:43:18
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
段家一凡(金币+1): 2010-03-16 00:36
amisking(金币+4): 2010-03-17 12:36
你想测序什么,测序微生物的某个基因,还是整个基因组?
我认为你没有必要在乎植物DNA污染微生物基因组,不论你的目的是什么,之后你都要使用特异的引物钓到你要测序的微生物片段,也就是说你使用的引物是对微生物基因组特异的,所以测序不会测到植物的DNA序列,没有必要担心了
说一下你具体要测什么,我们再分析一下,植物DNA到底存不存在干扰
3楼2010-03-15 22:27:09
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段家一凡

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-15 22:27:09:
你想测序什么,测序微生物的某个基因,还是整个基因组?
我认为你没有必要在乎植物DNA污染微生物基因组,不论你的目的是什么,之后你都要使用特异的引物钓到你要测序的微生物片段,也就是说你使用的引物是对微生 ...

谢谢。我的是宏基因组测序,宏基因组我解释一下,是一个环境样品所有微生物的的基因组,是一个混合基因组,比如土壤,可能有上1000中细菌和真菌,我的目的就是要吧这一千种微生物的基因组全部的序列都拿到手,当然是理论上的。我现在讲的瘤胃是牛的降解植物性食物的地方,植物性食物是共生其中的微生物降解的,微生物是结合在植物细胞壁的,不是一种菌,可能也是上1000种菌,我的目的是对微生物的基因组测序,而不想测到植物的基因组序列,一般的宏基因组提取方法都不可避免提到植物的DNA,如果提到的植物的DNA多的话,那么最终很大部分的测序就是做的无用功,比如我测得100G的序列,其中植物的占了一半,那不是亏大了。不知我解释清楚没有。我不是测一个基因组,也不是克隆某个基因,使用高通量测序技术如solexa和454对整个的微生物系统做研究。问题的关键是植物和微生物混在一起,有没有只是把微生物的细胞破裂,而植物的细胞没有破裂的一种方法?
4楼2010-03-16 00:36:08
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