24小时热门版块排行榜    

查看: 697  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wwling

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】PCR条带极弱怎样改善?

我要扩的是600多bp的目的基因,模板为底泥微生物宏基因组。做过多次每次结果都是有隐约的条带(非常弱,上样20ul还是只能看到隐约的条带,条带大小符合),引物二聚体也不亮。同一模板扩过1000bp的片段,条带很亮,扩这个600多的却总是很弱的条带。试过加大循环数,结果一样,做了退火温度梯度,也不理想。想问问大家PCR条带弱怎么改善?宏基因中的微量DNA做PCR是不是都挺难扩呢?希望大家交流一下。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwling

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by wwling at 2010-03-15 16:08:08:
我要扩的是600多bp的目的基因,模板为底泥微生物宏基因组。做过多次每次结果都是有隐约的条带(非常弱,上样20ul还是只能看到隐约的条带,条带大小符合),引物二聚体也不亮。同一模板扩过1000bp的片段,条带很亮 ...

谢谢!的确很有效果 不知二次扩增的产物和原产物差别大不 测序应该有效吧?
6楼2010-03-16 13:04:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-15 18:37
二次PCR吧,应该会有效,但是我估计要稀释至少10倍

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-15 at 16:25 ]
2楼2010-03-15 16:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-15 18:37
楼上说的有道理,二次PCR,这是较快一点能尝试的方法。
要不就重新设计引物,改善引物。
3楼2010-03-15 16:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物特异性不强,很难扩亮,如果引物很特异,那就增加模板的加入量再试试
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
4楼2010-03-15 19:54:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +27 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 28/1400 2026-08-13 20:45 by ahfrCgoFVCRh
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见