24小时热门版块排行榜    

查看: 686  |  回复: 5
当前主题已经存档。

wwling

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】PCR条带极弱怎样改善?

我要扩的是600多bp的目的基因,模板为底泥微生物宏基因组。做过多次每次结果都是有隐约的条带(非常弱,上样20ul还是只能看到隐约的条带,条带大小符合),引物二聚体也不亮。同一模板扩过1000bp的片段,条带很亮,扩这个600多的却总是很弱的条带。试过加大循环数,结果一样,做了退火温度梯度,也不理想。想问问大家PCR条带弱怎么改善?宏基因中的微量DNA做PCR是不是都挺难扩呢?希望大家交流一下。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-15 18:37
二次PCR吧,应该会有效,但是我估计要稀释至少10倍

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-15 at 16:25 ]
2楼2010-03-15 16:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-15 18:37
楼上说的有道理,二次PCR,这是较快一点能尝试的方法。
要不就重新设计引物,改善引物。
3楼2010-03-15 16:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物特异性不强,很难扩亮,如果引物很特异,那就增加模板的加入量再试试
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
4楼2010-03-15 19:54:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

如果各方面条件都没问题,还是不亮,那就用你这不亮的作为模板二次扩增
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
5楼2010-03-15 19:56:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwling

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by wwling at 2010-03-15 16:08:08:
我要扩的是600多bp的目的基因,模板为底泥微生物宏基因组。做过多次每次结果都是有隐约的条带(非常弱,上样20ul还是只能看到隐约的条带,条带大小符合),引物二聚体也不亮。同一模板扩过1000bp的片段,条带很亮 ...

谢谢!的确很有效果 不知二次扩增的产物和原产物差别大不 测序应该有效吧?
6楼2010-03-16 13:04:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wwling 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 听说今天filecode变了 +22 布布和一二 2026-08-06 45/2250 2026-08-07 14:14 by 日月天地
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +23 低垂的野花 2026-07-31 31/1550 2026-08-07 12:22 by speculiar
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 基金中了 +11 laoda193707 2026-08-06 11/550 2026-08-07 10:54 by TT和NN
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +4 archvillain 2026-08-06 8/400 2026-08-07 08:06 by 带你看大海
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见