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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wwling

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】PCR条带极弱怎样改善?

我要扩的是600多bp的目的基因,模板为底泥微生物宏基因组。做过多次每次结果都是有隐约的条带(非常弱,上样20ul还是只能看到隐约的条带,条带大小符合),引物二聚体也不亮。同一模板扩过1000bp的片段,条带很亮,扩这个600多的却总是很弱的条带。试过加大循环数,结果一样,做了退火温度梯度,也不理想。想问问大家PCR条带弱怎么改善?宏基因中的微量DNA做PCR是不是都挺难扩呢?希望大家交流一下。
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-15 18:37
楼上说的有道理,二次PCR,这是较快一点能尝试的方法。
要不就重新设计引物,改善引物。
3楼2010-03-15 16:37:56
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-15 18:37
二次PCR吧,应该会有效,但是我估计要稀释至少10倍

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-15 at 16:25 ]
2楼2010-03-15 16:24:02
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物特异性不强,很难扩亮,如果引物很特异,那就增加模板的加入量再试试
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
4楼2010-03-15 19:54:35
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

如果各方面条件都没问题,还是不亮,那就用你这不亮的作为模板二次扩增
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
5楼2010-03-15 19:56:05
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