24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 592  |  回复: 5
当前主题已经存档。

wwling

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】PCR条带极弱怎样改善?

我要扩的是600多bp的目的基因,模板为底泥微生物宏基因组。做过多次每次结果都是有隐约的条带(非常弱,上样20ul还是只能看到隐约的条带,条带大小符合),引物二聚体也不亮。同一模板扩过1000bp的片段,条带很亮,扩这个600多的却总是很弱的条带。试过加大循环数,结果一样,做了退火温度梯度,也不理想。想问问大家PCR条带弱怎么改善?宏基因中的微量DNA做PCR是不是都挺难扩呢?希望大家交流一下。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-15 18:37
二次PCR吧,应该会有效,但是我估计要稀释至少10倍

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-15 at 16:25 ]
2楼2010-03-15 16:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-15 18:37
楼上说的有道理,二次PCR,这是较快一点能尝试的方法。
要不就重新设计引物,改善引物。
3楼2010-03-15 16:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物特异性不强,很难扩亮,如果引物很特异,那就增加模板的加入量再试试
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
4楼2010-03-15 19:54:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

如果各方面条件都没问题,还是不亮,那就用你这不亮的作为模板二次扩增
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
5楼2010-03-15 19:56:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwling

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by wwling at 2010-03-15 16:08:08:
我要扩的是600多bp的目的基因,模板为底泥微生物宏基因组。做过多次每次结果都是有隐约的条带(非常弱,上样20ul还是只能看到隐约的条带,条带大小符合),引物二聚体也不亮。同一模板扩过1000bp的片段,条带很亮 ...

谢谢!的确很有效果 不知二次扩增的产物和原产物差别大不 测序应该有效吧?
6楼2010-03-16 13:04:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wwling 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 求老师收留 +3 lllq123 2026-04-03 3/150 2026-04-03 08:20 by 495374996
[考研] 280求调剂 +13 咕噜晓晓 2026-04-02 14/700 2026-04-02 22:53 by 无际的草原
[考研] 302求调剂一志愿华中师范大学 +7 小江小江江江 2026-04-02 7/350 2026-04-02 21:48 by macy2011
[考研] 296求调剂 +4 sdhu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:29 by baoball
[考研] 343求调剂085601 +5 要努力学习x 2026-03-29 6/300 2026-04-02 21:18 by 1104338198
[基金申请] esi高被引论文是不是能对中标有所加分和帮助呢 +4 redcom 2026-04-01 5/250 2026-04-02 20:48 by redcom
[考研] 293求调剂 +4 珂珂乐 2026-04-02 4/200 2026-04-02 20:10 by 6781022
[考研] 农学考研求调剂 +3 dkdkxm 2026-04-01 3/150 2026-04-02 16:04 by wangjagri
[考研] 材料化工340求调剂 +5 jhx777 2026-03-30 5/250 2026-04-02 12:45 by smileboy2006
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +7 Ong3 2026-03-27 7/350 2026-04-02 11:29 by 3041
[考研] 265求调剂11408 +4 刘小鹿lu 2026-03-27 4/200 2026-04-02 11:27 by guyan1000
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-01 12/600 2026-04-02 09:15 by olim
[考博] 26年申博 +3 staryer 2026-03-30 4/200 2026-04-01 23:21 by ai4pharm
[考研] 英一数二生物信息学287分,本科生物科学,求调剂 +3 碧水xyz 2026-03-29 4/200 2026-04-01 15:35 by plum
[考研] 288资源与环境专硕求调剂,不限专业,有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
[考研] 070300化学354求调剂 +15 101次希望 2026-03-28 15/750 2026-03-31 17:58 by jp9609
[考研] 282求调剂 +3 呼吸都是减肥 2026-03-31 3/150 2026-03-31 10:00 by wangjy2002
[考研] 抱歉 +4 田洪有 2026-03-30 4/200 2026-03-30 21:26 by mumin1990
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-27 6/300 2026-03-28 14:10 by 唐沐儿
[考研] 一志愿吉大071010,316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
信息提示
请填处理意见