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mltragassi

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】HarveyWang大虾，来领金币。谢谢你的帮助。

谢谢你给我的指导。太谢谢了。你再帮我看看，我的（电极）上样缓冲液是：PH7.8的Tris-HCl，5%巯基乙醇，2%的SDS。有需要改进的吗？多谢了。
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1楼 2010-03-13 10:38:52
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 2010-03-13 20:10
引用回帖:
Originally posted by mltragassi at 2010-03-13 10:38:52:
谢谢你给我的指导。太谢谢了。你再帮我看看，我的（电极）上样缓冲液是：PH7.8的Tris-HCl，5%巯基乙醇，2%的SDS。有需要改进的吗？多谢了。

请注意我所说的缓冲液名称。
您的很可能是指蛋白上样Buffer，里面缺了甘油和溴酚蓝啊，

配方和蛋白样品处理方法直接copy我的就行啦。

若您的发酵液上清中的蛋白含量过低，可以先三氯乙酸（5~10%）沉淀浓缩，然后NaOH溶解，最后HCl调成中性的，再加入适量的蛋白上样Buffer。

例如发酵液可以由10 mL 浓缩成200-500uL。

或者直接拿发酵液100 uL加20uL蛋白上样Buffer来处理，然后加大蛋白上样量，例如上40uL，这样做浓缩效果是没有的，只是增加电泳时的蛋白量。



电泳Buffer是10X的配置（看我的SDS-PAGE的帖子），不叫  电极上样Buffer。

最后，以后就不用单独开贴来谢我啦，给小木虫省点版面^_^
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2010-03-13 18:01:03
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
mltragassi(金币+8): 2010-03-15 09:03
引用回帖:
Originally posted by mltragassi at 2010-03-13 10:38:52:
谢谢你给我的指导。太谢谢了。你再帮我看看，我的（电极）上样缓冲液是：PH7.8的Tris-HCl，5%巯基乙醇，2%的SDS。有需要改进的吗？多谢了。

另外，您是不是就是单纯看看走发酵液蛋白啊？不用非变性电泳吧？
我的那些配方是SDS——PAGE的。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2010-03-13 18:03:26
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