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mltragassi

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】HarveyWang大虾,来领金币。谢谢你的帮助。

谢谢你给我的指导。太谢谢了。你再帮我看看,我的(电极)上样缓冲液是:PH7.8的Tris-HCl,5%巯基乙醇,2%的SDS。有需要改进的吗?多谢了。
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HarveyWang

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amisking(金币+4): 2010-03-13 20:10
引用回帖:
Originally posted by mltragassi at 2010-03-13 10:38:52:
谢谢你给我的指导。太谢谢了。你再帮我看看,我的(电极)上样缓冲液是:PH7.8的Tris-HCl,5%巯基乙醇,2%的SDS。有需要改进的吗?多谢了。

请注意我所说的缓冲液名称。
您的很可能是指蛋白上样Buffer,里面缺了甘油和溴酚蓝啊,

配方和蛋白样品处理方法直接copy我的就行啦。

若您的发酵液上清中的蛋白含量过低,可以先三氯乙酸(5~10%)沉淀浓缩,然后NaOH溶解,最后HCl调成中性的,再加入适量的蛋白上样Buffer。

例如发酵液可以由10 mL 浓缩成200-500uL。

或者直接拿发酵液100 uL加20uL蛋白上样Buffer来处理,然后加大蛋白上样量,例如上40uL,这样做浓缩效果是没有的,只是增加电泳时的蛋白量。



电泳Buffer是10X的配置(看我的SDS-PAGE的帖子),不叫  电极上样Buffer。

最后,以后就不用单独开贴来谢我啦,给小木虫省点版面^_^
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2010-03-13 18:01:03
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HarveyWang

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海外行者

mltragassi(金币+8): 2010-03-15 09:03
引用回帖:
Originally posted by mltragassi at 2010-03-13 10:38:52:
谢谢你给我的指导。太谢谢了。你再帮我看看,我的(电极)上样缓冲液是:PH7.8的Tris-HCl,5%巯基乙醇,2%的SDS。有需要改进的吗?多谢了。

另外,您是不是就是单纯看看走发酵液蛋白啊?不用非变性电泳吧?
我的那些配方是SDS——PAGE的。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2010-03-13 18:03:26
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