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[交流]
【求助/交流】GST融合蛋白包涵体纯化及做抗体的问题
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我现在有一个10KD大小的蛋白需要做抗体 连到PGEX载体上表达出来的GST融合蛋白是包涵体 有人说GST融合蛋白如果用尿素变性后就挂不上柱子了 那么我这个融合蛋白应该如何纯化呢？ 变性后的蛋白可以直接拿去做抗体，但是我的目的蛋白质有10KD GST标签是26KD 我这样的情况是不是需要先将GST酶切掉？ 看分子克隆上的关于GST融合蛋白的酶切是先将融合蛋白挂柱 然后酶切。 这样来的话问题是我的融合蛋白是包涵体，如果变性了就挂不上柱子了。。。 希望各位老师指导下！ （另外我也做了his的融合蛋白。。。不知道是不是N端有信号肽的缘故，做了好几次都挂不上柱） |
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