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free-fish

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[交流] 【求助/交流】细菌三亲本杂交

三亲本杂交做了两个月了，都没得到想要的目的菌，不知道三亲本杂交的关键是什么，是不是由于菌种的问题，请大家指点一下，谢谢！我的目的质粒在
DH5α里，辅助菌pRK2013...

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1楼 2010-03-04 12:51:25

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天使托

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T.Shen

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专业: 微生物生理与生物化学
管辖: 微生物

★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-03-04 21:40
free-fish(金币+3): 2010-03-05 11:04

一般我们做的时候是3：3：1或者是1：1：1的比例，
1：先将三种菌分别药品培养至少12小时，菌长得越多越好；待第二天去做三亲株，将过夜的菌液进行离心，取上清，最后去下面的菌体，称重（便于算比例）；
2：比例算号之后稀释，将三种菌液点到一个板子上，培养一天，刮取混菌体，然后稀释，涂布，等菌长出来后刮去单克隆进行扩大培养，然后提质粒，进行验证！
有时候做实验就是看运气！