应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细菌三亲本杂交
81/1返回列表
查看: 1243  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 free-fish 的 12 个金币 ，回帖就立即获得 1 个金币，每人有 1 次机会

free-fish

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】细菌三亲本杂交

三亲本杂交做了两个月了，都没得到想要的目的菌，不知道三亲本杂交的关键是什么，是不是由于菌种的问题，请大家指点一下，谢谢！我的目的质粒在
DH5α里，辅助菌pRK2013...
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-04 12:51:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
free-fish(金币+2): 2010-03-04 13:59
关键在于三者的比例，还有就是你DH5α里面的质粒怎样了？慢慢做吧，我当时也是坐了好久才做出来的！
赞一下 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-03-04 13:56:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

free-fish

铜虫 (正式写手)
但是老师教的时候只说供体和辅助菌多些，受体菌少量，我也没在意具体的比例，我主要尝试plate mating, 也有尝试eppendorf mating,这个的话就是三者等比例，微生物看不见摸不着，也不知道问题在哪里，郁闷哦
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-04 14:03:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
free-fish(金币+1): 2010-03-04 14:24
能否详细介绍一下您遇到的问题？
赞一下 回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
4楼2010-03-04 14:08:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

free-fish

铜虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2):鼓励详细介绍。 2010-03-04 21:40
Plate mating
供体菌 培养12小时
辅助菌 培养12小时
受体菌 培养24小时（目的菌种需要培养这么长时间）
用手术刀刮取菌体（这个量不知道怎么描述，一般是尽可能多地把受体菌和辅助菌刮下来，因为大肠杆菌好像长得不疯狂，在平板上淡淡的），三种菌体各占一个点，然后用枪头把他们混匀，共培养48小时候转到筛选培养基中，长出来的单菌落用受体菌和供体质粒检测的两对引物去跑PCR，只有受体菌的引物嫩那个跑出带而供体菌的引物则没东西
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-03-04 14:23:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

free-fish

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2010-03-04 14:08:12:
能否详细介绍一下您遇到的问题？

已经回复了，您看看详细不？
赞一下 回复此楼
6楼2010-03-04 14:28:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-03-04 21:40
free-fish(金币+3): 2010-03-05 11:04
一般我们做的时候是3：3：1或者是1：1：1的比例，
1：先将三种菌分别药品培养至少12小时，菌长得越多越好； 待第二天去做三亲株，将过夜的菌液进行离心，取上清，最后去下面的菌体，称重（便于算比例）；
2：比例算号之后稀释，将三种菌液点到一个板子上，培养一天，刮取混菌体，然后稀释，涂布，等菌长出来后刮去单克隆进行扩大培养，然后提质粒，进行验证！
有时候做实验就是看运气！
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2010-03-04 21:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
free-fish(金币+2): 2010-03-05 11:04
我用的方法跟楼上的基本是一样的，效率也不是很高，铺十几块板才能筛出几个，有时候做实验就是看运气！
赞一下 回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
8楼2010-03-05 08:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 free-fish 的主题更新
81/1返回列表
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴，则可能无法领取此贴金币
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +6 0856?调剂 2026-04-10 6/300 2026-04-11 18:42 by wutongshun
[考研] 0854调剂 +6 长弓傲 2026-04-11 7/350 2026-04-11 17:58 by 长弓傲
[考研] 085404 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-08 8/400 2026-04-11 12:08 by zhq0425
[考研] 305求调剂 +5 77Qi 2026-04-07 5/250 2026-04-11 11:45 by zhq0425
[考研] 269求调剂 +8 跪求收留。 2026-04-04 8/400 2026-04-11 10:50 by zhq0425
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 材料085601调剂 +25 何润采123 2026-04-10 27/1350 2026-04-10 23:17 by Ftglcn90
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +20 慕绝cc 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 10:22 by xujun0624
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所，有机化学356分找调剂 +11 Nadiums 2026-04-09 11/550 2026-04-09 18:04 by lijunpoly
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考研] 281求调剂 +10 椰子蘑菇 2026-04-06 10/500 2026-04-08 11:43 by zzucheup
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-06 15/750 2026-04-08 04:53 by 无际的草原
[考研] 085602调剂 初试总分335 +10 19123253302 2026-04-05 10/500 2026-04-07 15:23 by 小乔同学ya
[考研] 316求调剂 +7 yyx想调剂 2026-04-05 7/350 2026-04-07 14:31 by shdgaomin
[考研] 一志愿武汉理工大学080200机械工程308分，求调剂 +4 终不似从前 2026-04-05 4/200 2026-04-06 11:46 by 考研学校招点人
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭