24小时热门版块排行榜    

查看: 1348  |  回复: 7
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 free-fish 的 12 个金币 ,回帖就立即获得 1 个金币,每人有 1 次机会
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

free-fish

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】细菌三亲本杂交

三亲本杂交做了两个月了,都没得到想要的目的菌,不知道三亲本杂交的关键是什么,是不是由于菌种的问题,请大家指点一下,谢谢!我的目的质粒在
DH5α里,辅助菌pRK2013...
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

free-fish(金币+1): 2010-03-04 14:24
能否详细介绍一下您遇到的问题?
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
4楼2010-03-04 14:08:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

free-fish(金币+2): 2010-03-04 13:59
关键在于三者的比例,还有就是你DH5α里面的质粒怎样了?慢慢做吧,我当时也是坐了好久才做出来的!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-03-04 13:56:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

free-fish

铜虫 (正式写手)

但是老师教的时候只说供体和辅助菌多些,受体菌少量,我也没在意具体的比例,我主要尝试plate mating, 也有尝试eppendorf mating,这个的话就是三者等比例,微生物看不见摸不着,也不知道问题在哪里,郁闷哦
3楼2010-03-04 14:03:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

free-fish

铜虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2):鼓励详细介绍。 2010-03-04 21:40
Plate mating
供体菌 培养12小时
辅助菌 培养12小时
受体菌 培养24小时(目的菌种需要培养这么长时间)
用手术刀刮取菌体(这个量不知道怎么描述,一般是尽可能多地把受体菌和辅助菌刮下来,因为大肠杆菌好像长得不疯狂,在平板上淡淡的),三种菌体各占一个点,然后用枪头把他们混匀,共培养48小时候转到筛选培养基中,长出来的单菌落用受体菌和供体质粒检测的两对引物去跑PCR,只有受体菌的引物嫩那个跑出带而供体菌的引物则没东西
5楼2010-03-04 14:23:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴,则可能无法领取此贴金币
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见