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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】师姐的实验出现了一个奇怪的现象，求指教
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

[交流] 【求助/交流】师姐的实验出现了一个奇怪的现象，求指教

各位虫友：
师姐在利用表达了一种水解酶的重组大肠杆菌进行转化实验时，意外的发现不加IPTG也可以进行转化，那么这个大肠杆菌中也没有乳糖操纵子，这是不是意味着不需要诱导酶也有可能表达呢？
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1楼 2010-03-03 11:24:52
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wangyanhua

重大发现
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2楼2010-03-03 11:47:29
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银杏下

金虫 (小有名气)
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amisking(金币+2): 2010-03-03 12:29
得看所用载体和菌株，有的载体与相应菌株在一起出现本底表达很正常。
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3楼2010-03-03 11:51:44
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-03 23:37
不太理解 “不加IPTG也可以转化”


不加IPTG可以表达的话是一种很正常的现象，没什么可意外的，应为平常用的蛋白胨中都含有微量的乳糖，可以开启表达。
再说了乳糖操纵子自身也有半衰期，可以不需诱导开放，但是这种水平非常低。

[ Last edited by 月月大可 on 2010-3-3 at 12:07 ]
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4楼2010-03-03 12:04:13
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-03-03 12:04:13:
不太理解 “不加IPTG也可以转化”


不加IPTG可以表达的话是一种很正常的现象，没什么可意外的，应为平常用的蛋白胨中都含有微量的乳糖，可以开启表达。
再说了乳糖操纵子自身也有半衰期，可以不需诱导开放， ...

是这样的，师姐的实验是利用生物转化的方法生产染料，照理来说，加了IPTG才能诱导加氧酶的表达，可是实验发现，不加IPTG可以生成大量的产物，转化率还非常的高。按照您的说法，不应该能产生大量的产物啊~请指教
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5楼2010-03-03 12:18:39
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by 银杏下 at 2010-03-03 11:51:44:
得看所用载体和菌株，有的载体与相应菌株在一起出现本底表达很正常。

谢谢您的指教，我回去查查载体和菌株看看~呵呵
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6楼2010-03-03 12:19:45
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pengl001

木虫 (小有名气)
谢谢，学习了
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Yes,Ican!
7楼2010-03-03 12:22:13
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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我使用TOP-10载体的时候，是不加IPTG的，但是使用PGEM T-easy载体就要加IPTG，有些载体就是不需要IPTG的
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8楼2010-03-03 12:52:55
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
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载体上如果是组成型的,如没有lacI,本来就不要加IPTG
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9楼2010-03-03 14:15:05
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
IPTG一般用来诱导T7启动子表达，有着较高的本底表达，就是你什么都不加，也会有表达出现。T7启动子本身就是Lac启动子改造的，你的培养基里的一些成分有可能扮演了诱导剂的角色。可以以此为空白对照。
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10楼2010-03-03 15:42:31
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