应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'RACE
101/1返回列表
查看: 932  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

elliott2591

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】5'RACE 已有3人参与

最近在做5‘RACE，用的是Takara的盒子，innerPCR之后条带在1.5k~3k之间弥散，提高退火温度至65°，降低Mg浓度及dNTPs用量，稀释outer 产物50倍，取4ul，等等方法均尝试仍如此，实在无法解决，求助各位大侠！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-02 11:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)
elliott2591(金币+1):我的酶没有问题，因为我做3RACE也用的该酶 2010-03-18 20:13
elliott2591(金币+1): 2010-03-18 20:14
我当时用的是clonetech的盒子，很顺利的，你的酶应该好用吧？其他的因素一般不会出什么问题的
赞一下 回复此楼
2楼2010-03-04 00:52:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elliott2591

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 695 at 2010-03-04 00:52:07:
我当时用的是clonetech的盒子，很顺利的，你的酶应该好用吧？其他的因素一般不会出什么问题的

我用的酶是LA Taq（Takara的），换了KOD依然如此，不知道是什么原因了
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-04 10:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
elliott2591(金币+1):也有可能，不过我换了引物还是不行，哎，郁闷啊 2010-03-18 20:14
可能跟引物有关系，建议你重新设计引物，一般5RACE得设计两三条引物才有可能有好的，想一个就出好，除非运气很好

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-4 at 13:01 ]
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-04 10:59:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-04 10:59:54:
可能跟引物有关系，建议你重新设计引物，一般5RACE得设计两三对引物才有可能有好的，想一个就出好，除非运气很好

同意，race有时候真的说不准
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-04 12:56:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
你试试巢式PCR吧，设计两个引物，先跑外面的引物，然后用PCR产物做模板，再跑里面的引物，这个用clontech的盒子是有介绍的，宝生物的盒子就不了解了，不过跑个半巢式PCR应该是没有问题的，就是Universal引物一直使用
赞一下 回复此楼
6楼2010-03-18 21:35:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 695 at 2010-03-04 00:52:07:
我当时用的是clonetech的盒子，很顺利的，你的酶应该好用吧？其他的因素一般不会出什么问题的

请问你用的clonetech的盒子做5'RACE时，PCR反应条件也是严格按照那个盒子的说明做的吗？我已经做了半年了，可是还是毫无进展，希望可以和你交流交流！
赞一下 回复此楼
7楼2010-04-15 15:47:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genewind

金虫 (小有名气)
本人没用试剂盒，反转录后加个polyA尾巴。
赞一下 回复此楼
8楼2010-04-15 15:50:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genewind

金虫 (小有名气)
可以给你那本PCR的书籍！QQ250748548
赞一下 回复此楼
9楼2010-04-15 15:50:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
elliott2591(金币+1):谢谢，在改进方法┄┄ 2010-04-22 16:59
做5RACE本来即使要看运气，你可以多试试在引物上下功夫，实在没有结果，你可以做WALKING，看能往上游走多少，软件分析下，到没到你的期望，5端的帽子很容易降解，你提RNA的时候要尽可能保证RNA的质量，和反转录的效率
赞一下 回复此楼
10楼2010-04-15 16:13:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 elliott2591 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭