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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'RACE
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elliott2591

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】5'RACE 已有3人参与

最近在做5‘RACE，用的是Takara的盒子，innerPCR之后条带在1.5k~3k之间弥散，提高退火温度至65°，降低Mg浓度及dNTPs用量，稀释outer 产物50倍，取4ul，等等方法均尝试仍如此，实在无法解决，求助各位大侠！
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1楼 2010-03-02 11:38:34
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cqyniu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 695 at 2010-03-04 00:52:07:
我当时用的是clonetech的盒子，很顺利的，你的酶应该好用吧？其他的因素一般不会出什么问题的

请问你用的clonetech的盒子做5'RACE时，PCR反应条件也是严格按照那个盒子的说明做的吗？我已经做了半年了，可是还是毫无进展，希望可以和你交流交流！
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7楼2010-04-15 15:47:59
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695

木虫 (职业作家)
elliott2591(金币+1):我的酶没有问题，因为我做3RACE也用的该酶 2010-03-18 20:13
elliott2591(金币+1): 2010-03-18 20:14
我当时用的是clonetech的盒子，很顺利的，你的酶应该好用吧？其他的因素一般不会出什么问题的
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2楼2010-03-04 00:52:07
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elliott2591

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 695 at 2010-03-04 00:52:07:
我当时用的是clonetech的盒子，很顺利的，你的酶应该好用吧？其他的因素一般不会出什么问题的

我用的酶是LA Taq（Takara的），换了KOD依然如此，不知道是什么原因了
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3楼2010-03-04 10:20:05
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
elliott2591(金币+1):也有可能，不过我换了引物还是不行，哎，郁闷啊 2010-03-18 20:14
可能跟引物有关系，建议你重新设计引物，一般5RACE得设计两三条引物才有可能有好的，想一个就出好，除非运气很好

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-4 at 13:01 ]
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4楼2010-03-04 10:59:54
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