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咕噜丫丫

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR电泳图有很多条带,高手请帮忙看看

这是我的电泳图,采用DL2000MARKER,出现了很多条带,大家能帮我分析下原因吗?万分感谢!
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zzw1221

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你问的太简单了,你要让大家知道你这个做什么用的,片段大小,
因为不同目的有不同的处理方法,还是有区别的
总体感觉这个问题不难解决
2楼2010-03-01 13:10:42
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段家一凡

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
增加特异性一般可以通过提高退火温度和降低模板浓度实现,你可以试一下
3楼2010-03-01 13:20:35
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yangym1123

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
赞同一楼的说法!首先明确你要做什么,是要克隆基因扩增片段吗?如果是这样,如果已经有主带(看有一条接近两千的条带比较特异),并且回收没问题,没必要优化也可以的!
4楼2010-03-01 13:47:17
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶浓度 镁离子浓度 退火温度 以及试剂 甚至空气不流通导致的污染都可能会出现杂带。
5楼2010-03-02 22:30:07
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gaozx123

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
亮带如果是你要的条带的话,直接回收倒也可以。如果想要好的结果,你可以提高一下退火温度,模板量降低一些,不行的话,就是你的引物特异性不高了。
6楼2010-03-03 08:45:34
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咕噜丫丫

新虫 (初入文坛)

不好意思,没说清楚,我是扩增基因之后要测定这个基因序列,目的条带是1400kb,很亮的那条应该就是了。
7楼2010-03-05 14:42:19
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咕噜丫丫

新虫 (初入文坛)

引物是我自己设计的,我就怕特异性不高才导致这样,我先试试提高温度看。
谢谢大家的回复!
8楼2010-03-05 14:43:57
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mourning

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有可能是引物问题,引物GC高了会有费特异,可以试试TAKARA的PRIMESTAR的酶,保证性和活性都可以,你也可以先把亮带回收了做T连接测序看看
9楼2010-03-05 14:54:36
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zzw1221

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以尝试用你跑得那个pcr 产物做模板,用原引物再扩一次。有目的带其实可以回收测序,电泳时间长点,免得带入咋带。好运
10楼2010-03-05 16:28:17
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