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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR电泳图有很多条带，高手请帮忙看看
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咕噜丫丫

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR电泳图有很多条带，高手请帮忙看看

这是我的电泳图，采用DL2000MARKER，出现了很多条带，大家能帮我分析下原因吗？万分感谢！
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1楼 2010-03-01 12:55:10
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zzw1221

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你问的太简单了，你要让大家知道你这个做什么用的，片段大小，
因为不同目的有不同的处理方法，还是有区别的
总体感觉这个问题不难解决
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2楼2010-03-01 13:10:42
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段家一凡

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
增加特异性一般可以通过提高退火温度和降低模板浓度实现，你可以试一下
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3楼2010-03-01 13:20:35
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yangym1123

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
赞同一楼的说法！首先明确你要做什么，是要克隆基因扩增片段吗？如果是这样，如果已经有主带（看有一条接近两千的条带比较特异），并且回收没问题，没必要优化也可以的！
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4楼2010-03-01 13:47:17
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶浓度 镁离子浓度 退火温度 以及试剂 甚至空气不流通导致的污染都可能会出现杂带。
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5楼2010-03-02 22:30:07
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
亮带如果是你要的条带的话，直接回收倒也可以。如果想要好的结果，你可以提高一下退火温度，模板量降低一些，不行的话，就是你的引物特异性不高了。
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6楼2010-03-03 08:45:34
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咕噜丫丫

新虫 (初入文坛)
不好意思，没说清楚，我是扩增基因之后要测定这个基因序列，目的条带是1400kb，很亮的那条应该就是了。
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7楼2010-03-05 14:42:19
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咕噜丫丫

新虫 (初入文坛)
引物是我自己设计的，我就怕特异性不高才导致这样，我先试试提高温度看。
谢谢大家的回复！
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8楼2010-03-05 14:43:57
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mourning

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有可能是引物问题，引物GC高了会有费特异，可以试试TAKARA的PRIMESTAR的酶，保证性和活性都可以，你也可以先把亮带回收了做T连接测序看看
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9楼2010-03-05 14:54:36
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zzw1221

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以尝试用你跑得那个pcr 产物做模板，用原引物再扩一次。有目的带其实可以回收测序，电泳时间长点，免得带入咋带。好运
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10楼2010-03-05 16:28:17
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