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88196861铜虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】拟南芥种植
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| 请问一下我是在MS培养基中种植的拟南芥，请问长多久可以将其转入盆中，这些拟南芥是转化用的。对土有什么要求，现在在培养基中的拟南芥大概有5厘米高了。 |
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5楼2010-03-05 13:26:47
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花序浸染法转化拟南芥 （1）种植：选择吸水性好，土质松软的至石配合营养土（1：1/2）作为拟南芥种植土壤。直径9cm的花盆，每盆播种20-30颗。播种以后在花盆上罩上薄膜，给植株的生长提供一个湿润的环境。 （2）去顶：在拟南芥初次开花时将花蕾剪掉，可以促进侧枝更多的花枝的增生。适合转化植株的花卉并没有成熟，也没有产生已受精的角果。 （3）配制浸染液：在5%的蔗糖溶液中重悬农杆菌使OD=0.8，为了保持蔗糖溶液的新鲜，可以现配现用，无需灭菌。100-200ml浸染2-3个小盆植株，400-500ml浸染，2-3个花盆（9cm）植株。在浸染之前加入表面活性剂至浓度0.05%（500ul/L），如果产生表面活性剂的毒性现象（浸过部分发黄或死亡），将浓度降至0.02%。 （4）浸染：将盛花期拟南芥的花表面部分浸泡在农杆菌悬浮液中2-3s，同时轻轻旋转。 （5）暗培养：将浸染后植株套袋保持高度的湿润状态暗室培养24h。 （6）浸染后培养：隔天浇水，保证水分充足即可。 （7）种子收集：种子成熟，角果自然开裂后可以收种子。 （8）转基因种子筛选：在含有Kan抗生素的平板上培养浸染后所得种子。40mg的种子大约200颗于含kan 10-50μg/ml 的0.5×MS培养基上春化2天，之后在持续光照条件下培养7-10天。根据生长状况判断是否为转基因种子。成功转入重组质粒的种子能够在抗性培养及上正常生长出4片以上真叶。非转基因种子不能正常生长，仅能长出2片子叶，根的生长也受到严重抑制，一般萌发10天以后死亡。 （9）转基因植株转土栽培。转基因种子在MS+kan平板上萌发2周以后，将阳性植株转入土壤继续培养。 |
2楼2010-02-20 16:37:00
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