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liujiahui木虫 (著名写手)
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[交流]
【求助/交流】有人自己装Superdex或superose的凝胶柱吗，效果怎样？
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如题，看到superdex-200很多都是和HPLC连用（好像），我们实验室，只是想用这个东西分一下我们的产品，也还不知道分离的效果会怎样。所以不会考虑买预装柱（太贵）。 有人自己装过superdex-200或superose的凝胶柱吗？有什么注意事项没有？一般需要柱长很长吗？是不是要求比较高啊？ 多谢交流！ [ Last edited by liujiahui on 2010-2-12 at 22:52 ] |
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liujiahui
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2楼2010-02-14 00:54:38
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3楼2010-02-14 03:19:50
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4楼2010-02-15 22:54:18
liujiahui
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5楼2010-02-16 23:55:08
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6楼2010-02-17 09:37:47
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雷到您真是不好意思。可能我没有问明白吧。 1. 我没有问柱子分离的效果怎么样，我只是不知道Superdex或superose分我的样品效果会怎么样。我不知道，我也没有问，只是因为不知道效果会怎样，所以不想花很多钱去买预填充的柱子。 2. 为什么不可以问有什么注意事项呢？Anersham教怎么填柱子的光盘，19刀一张（没好意思跟老板说买）。Gel Filtration的手册里Appendix 1是讲怎么填柱子的，只是Sephadex的讲的比较详细（而且，有好多小配件我是没有的，如reservoir, top adaptor都不知是啥）。既然，公司的预填充柱有生意可做，就说明填柱子是很有学问的。 3. 柱子的长度是由胶料决定的，胶料是由想要分离的样品决定的。我在药学版发的帖子，回复的帖子说脱盐用的G25的柱子通常是短粗的，那么以此类推，Superdex-200的柱子是不是要细长的比较好呢？还是几个短粗的串联比较好呢？怎么样分辨率比较高呢？ 4. 我装过G50的柱子，那个很简单。G100的我也装过，那个的重复性就相对差一点。我还想问，一般的操作步骤上都说，在向G50或G100胶中加入水以后，要把上层的细颗粒倒掉，我想问，一般大家都会倒掉什么样的颗粒呢？倒掉了多少胶呢？我看手册上说，要倒掉25%。我以前都没有严格操作这一步，怎么能分掉25%的胶呢？ G50和G100都是在基本没有人指导的情况下装的，所以一直有一个疑问：1. 柱子里胶的上方水是满的吗？还是水不用加满，上方有空气也可以。我没装过Superdex或Superose的柱子，所以才来问的。 [ Last edited by liujiahui on 2010-2-18 at 00:52 ] |
7楼2010-02-18 00:27:24
mimisikai
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liujiahui(金币+5):thank you! 2010-02-18 23:57
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1.分离效果不是别人说的，而是根据你实验来的，就是你分离啥，针对这种物质用这种填料，分离效果咋样 所以，要知道效果，要么自己试 要么看文献 2.装柱子的视频，网上有，请仔细多多寻找。reservoir adaptor等是和GE的空柱子一起来的，如果你买了GE的空柱子，就有这些东西，若果你用个玻璃管子 那就算了 3.注意，G25脱盐可以用短粗的柱子，而分子筛不管是G系列还是Superdex Superose等填料，这些都是分子筛，所以装的柱子必须是细长的！通常1m左右。没看过有人将短粗的串联起来当分子筛的，牛！ 4.G50 100 的填料很老了。若买来的是粉末，煮沸后可以将上面漂浮的颗粒倒了。 5.上面有没有水，这取决于你用啥柱子，若用GE的柱子，不管是预装的还是空柱子，最后会将adaptor压到填料层上。 |
8楼2010-02-18 20:40:05
liujiahui
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多谢指教！ 1. 我用的柱子是： Kontes* Chromaflex* Columns K420830 Series Ideal for medium-pressure chromatography with aqueous mobile phases See details Includes: Glass barrel, Two PTFE end fittings with 20µm porosity polyethylene bed supports, 5 ft. (1.5m) of PTFE tubing (1/16 in. O.D. tubing with 1.0cm I.D. columns, 1/8 in. O.D. tubing with 2.5 and 4.8cm I.D. columns), Two flangeless tubing nuts, Two flangeless ferrules http://www.fishersci.com/wps/por ... ProductsItemsFlag=Y （可悲啊，我百度和google都没找到这种管子）不知道是不是你所说的玻璃管。因为我以前确实用过玻璃管填柱子。。。不过这个不是GE的产品，所以没有那些配件。那这种管子的话，满足填装S胶的条件吗？ 2. G50，G100的胶很老了，每天每天做着很古老很古老的实验，进了一个每天做些无聊的事情的专业方向啊，真的很无奈  。3. S胶填好的柱子，走的时候是不是里面压力很大呀？ 4. 另外，多个柱子串联和一根长的柱子的区别是什么呢？ 多谢！ [quote]Originally posted by mimisikai at 2010-02-18 20:40:05: 1.分离效果不是别人说的，而是根据你实验来的，就是你分离啥，针对这种物质用这种填料，分离效果咋样 所以，要知道效果，要么自己试 要么看文献 2.装柱子的视频，网上有，请仔细多多寻找。reservoir adaptor等是 ... [ Last edited by liujiahui on 2010-2-19 at 03:22 ] |
9楼2010-02-19 00:20:59
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liujiahui(金币+1):谢谢参与
liujiahui(金币+6):thank you! 2010-02-19 23:02
liujiahui(金币+1):谢谢参与
liujiahui(金币+6):thank you! 2010-02-19 23:02
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1.Fisher的柱子没用过。但是原则上是一样的，分子筛就是细长，我通常用的柱子是1m*1.5-2cm的。 怎么装柱子，怎么连接还要看你用在什么系统上面？是AKTA还是其他？若没有这些配件，是不能连接到封闭的纯化系统中的。 2.s胶每一种都有其限定的压力范围，不能超范围了，所以这就体现出用AKTA等系统的优势，可以控制压力上限。当然，如果没有，就重力柱吧，或者蠕动泵低速来，1分钟1ml时压力应该是可以接受的。 3.串联咋的串？20cm长的柱子接5个？不行的。分子筛就是靠大小来分离分子，长柱子就要保证足够的分辨率，即长度越长，理论上分离效果越佳。每个柱子的理论塔板数是不一样的，你连接后，样品一个个的过，在每个柱子中的柱效有差别，轻者分离效果差，严重就是根本分离不出来。当然，这个问题我以前没想过也没试过，只是凭理论来讲讲，你也可以尝试一下，应该是行不通的。 |
10楼2010-02-19 22:14:52
