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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么两次PCR的结果差这么多？
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刘仕博

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】为什么两次PCR的结果差这么多？

前后做了两次荧光定量PCR。这两次用的样品是分两次处理的，但处理的方法是一样的。所以理想状态下，两次PCR的结果应该是一样的，就算不一样也应该差的不多吧。但吓人的是，如果空白的值是1的话，第一次的结果大约是2到3，而第二次的结果大约是0.0~0.4，这两次实验用的空白也是分开处理的。不知道哪位高手给解释下~
先谢啦！
对刚才忘了个事情，第一次提取RNA的时候提取完了就直接用了。第二次因为260/280的值不是很理想，所以就纯化了下，会不会是这个原因呢？
还有就是我的actin的溶解曲线不是很好，不过我感觉不会对结果造成这么大的影响。。。

[ Last edited by 刘仕博 on 2010-2-9 at 18:25 ]
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生命在于折腾~
1楼 2010-02-09 17:34:02
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cyjwx123

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-02-09 22:04
如果方法一样的话，我觉得应该是模板制备这个环节出了问题，毕竟你是把模板分2次进行处理的。
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看的开才是真本事~
2楼2010-02-09 18:05:35
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刘仕博

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by cyjwx123 at 2010-02-09 18:05:35:
如果方法一样的话，我觉得应该是模板制备这个环节出了问题，毕竟你是把模板分2次进行处理的。

但是一次的表达增加，一次的表达减少，这个可是实质性的区别啊~
不过我也打算重新准备样品，重新做呢~
谢谢！！！
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生命在于折腾~
3楼2010-02-09 18:26:47
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yang0071

木虫 (职业作家)
★ ★
amisking(金币+2): 2010-02-09 22:04
RNA纯化步骤出了问题可能
RNA本身就很容易降解
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4楼2010-02-09 19:21:52
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刘仕博

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2010-02-09 19:21:52:
RNA纯化步骤出了问题可能
RNA本身就很容易降解

很有可能呀~
有的人说提取完RNA就一定要纯化，是这样的吗？
赞一下 回复此楼
生命在于折腾~
5楼2010-02-09 20:53:39
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