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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot
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zjwang

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】western blot

最近做western blot的时候出现一点问题：我用的是GST标签，诱导蛋白走sds-page能看到诱导后出现一条新的带，但是western检测没有，而作为对照的空载体有GST条带。不知道怎么回事，大家有没有遇到过，求指点！谢过！
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1楼 2010-01-28 15:00:29
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
zjwang(金币+1): 2010-01-28 17:40
平行做，诱导的和没诱导的loading到gel上，明确是否真的诱导出来了，如果没问题，western blot没有带，说明蛋白没活性
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会当凌绝顶，一览众山小
5楼2010-01-28 17:34:05
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
zjwang(金币+1): 2010-01-28 17:41
对于Wester做的不多，没出现过你这种情况，应该是你诱导表达的蛋白没有活性吧？
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2楼2010-01-28 16:24:14
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yang0071

木虫 (职业作家)
zjwang(金币+1): 2010-01-28 17:41
使用的检测抗体是啥？目的蛋白分子量多少？大分子的话，可能空间构象上覆盖GST的抗体识别区域。建议使用目的蛋白的特异抗体
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3楼2010-01-28 16:31:26
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zjwang

木虫 (正式写手)
用gst抗体检测的，目的蛋白大约77k，加上gst差不多103k。像你说的空间构象覆盖gst抗体识别区几率有多大？没有目的蛋白的特异抗体。这个蛋白诱导后想过柱子纯化，这样western检测不出来不知道能不能过柱子。
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4楼2010-01-28 17:11:51
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