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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】小白请教，PCR有什么窍门吗？

就一普通PCR，我和师兄体系，引物，一摸一样，步骤也一摸一样，可是胶跑出来，师兄就有漂亮的条带，我怎么只有引物二聚体？我哭啊！！！！求高手赐教啊！！！有什么窍门啊？？？

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1楼 2010-01-27 17:43:57

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cyjwx123

铁虫 (小有名气)

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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1): 2010-03-04 20:37

每次都是这样的结果吗？还是偶尔一次？我觉得要检查自己是否哪个环节出错就是做一个平行实验，如果结果和上次一样的话，那么就把Mg2+，dNTP，还有Buffer都换下，最好酶也重新换下再做一次看，注意各个东西加入的顺序，一般是这样的顺序：先ddw，再加Taq酶的Buffer，再加入dNTP，forward-primer和reverse-primer，最后要迅速的加入Taq酶。体系配好之后要速度进行PCR扩增。