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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】小白请教，PCR有什么窍门吗？
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】小白请教，PCR有什么窍门吗？

就一普通PCR，我和师兄体系，引物，一摸一样，步骤也一摸一样，可是胶跑出来，师兄就有漂亮的条带，我怎么只有引物二聚体？我哭啊！！！！求高手赐教啊！！！有什么窍门啊？？？
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1楼 2010-01-27 17:43:57
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yang0071

木虫 (职业作家)
★ ★
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amisking(金币+1): 1-27 18:47
酶要最后加,加入之前,混匀你的溶液体系
从大容量开始加,一般先加水,然后是buffer, dNTP,引物,模板
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2楼2010-01-27 18:45:50
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
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司马诸葛(金币+1): 2010-03-04 20:36
首先你要按步骤依次加入反应物，混匀，
最重要的是你对于pcr的熟练度，越熟练做得越顺手，那么结果自然不用说了
我们实验室就有PCR做得很好的师兄，而且基本每次都很不错！
慢慢学习吧~
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2010-01-27 19:38:30
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
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如果不是mix的话，最关键是，每种组分要看着吸取到，看着加进去了。
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Thank-you，so-blue.
4楼2010-01-27 19:41:49
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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最好是做混合体系，混好了后分开，然后分别加引物和模版，有的时候引物或者模版也可以一起加
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5楼2010-01-27 20:17:09
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雨中蜗牛

金虫 (正式写手)
★
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有可能你的模板没加够量，也有可能是酶没加上，一回生二回熟，多做就好了
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■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾
6楼2010-01-27 21:31:04
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
多谢大家，我还得好好再做一遍啊，呵呵。
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7楼2010-01-28 08:21:02
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★ ★
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司马诸葛(金币+1): 2010-03-04 20:36
那你肯定出现在操作细节问题上。别人做实验的时候多观察细节问题，有备而作。现在的人都感觉实验没什么，不就那几步吗？可是一作就不出来，什么原因，只有嘴上说的，动手能力差。
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梦在路就在！
8楼2010-01-28 08:24:17
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
司马诸葛(金币+1): 2010-03-04 20:37
另外再给你个小建议，你刚开始做，体系大一点，感觉稍微稳定了，把体系降低到10ul，如果10ul体系你做的很稳定，每次跑都一样，那恭喜你，PCR培训成功。
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9楼2010-01-28 12:38:49
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hutingting

银虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by bigbangrex at 2010-01-27 17:43:57:
就一普通PCR，我和师兄体系，引物，一摸一样，步骤也一摸一样，可是胶跑出来，师兄就有漂亮的条带，我怎么只有引物二聚体？我哭啊！！！！求高手赐教啊！！！有什么窍门啊？？？

不一定是你PCR做的有问题，有可能是跑胶的时候出来问题，看看配胶过程
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10楼2010-01-28 12:44:05
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