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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】小白请教,PCR有什么窍门吗?

就一普通PCR,我和师兄体系,引物,一摸一样,步骤也一摸一样,可是胶跑出来,师兄就有漂亮的条带,我怎么只有引物二聚体?我哭啊!!!!求高手赐教啊!!!有什么窍门啊???
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yang0071

木虫 (职业作家)

★ ★
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amisking(金币+1): 1-27 18:47
酶要最后加,加入之前,混匀你的溶液体系
从大容量开始加,一般先加水,然后是buffer, dNTP,引物,模板
2楼2010-01-27 18:45:50
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
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司马诸葛(金币+1): 2010-03-04 20:36
首先你要按步骤依次加入反应物,混匀,
最重要的是你对于pcr的熟练度,越熟练做得越顺手,那么结果自然不用说了
我们实验室就有PCR做得很好的师兄,而且基本每次都很不错!
慢慢学习吧~
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2010-01-27 19:38:30
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


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如果不是mix的话,最关键是,每种组分要看着吸取到,看着加进去了。
Thank-you,so-blue.
4楼2010-01-27 19:41:49
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


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最好是做混合体系,混好了后分开,然后分别加引物和模版,有的时候引物或者模版也可以一起加
5楼2010-01-27 20:17:09
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雨中蜗牛

金虫 (正式写手)


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有可能你的模板没加够量,也有可能是酶没加上,一回生二回熟,多做就好了
■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾
6楼2010-01-27 21:31:04
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

多谢大家,我还得好好再做一遍啊,呵呵。
7楼2010-01-28 08:21:02
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫

★ ★
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司马诸葛(金币+1): 2010-03-04 20:36
那你肯定出现在操作细节问题上。别人做实验的时候多观察细节问题,有备而作。现在的人都感觉实验没什么,不就那几步吗?可是一作就不出来,什么原因,只有嘴上说的,动手能力差。
梦在路就在!
8楼2010-01-28 08:24:17
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


司马诸葛(金币+1): 2010-03-04 20:37
另外再给你个小建议,你刚开始做,体系大一点,感觉稍微稳定了,把体系降低到10ul,如果10ul体系你做的很稳定,每次跑都一样,那恭喜你,PCR培训成功。
9楼2010-01-28 12:38:49
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hutingting

银虫 (正式写手)


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引用回帖:
Originally posted by bigbangrex at 2010-01-27 17:43:57:
就一普通PCR,我和师兄体系,引物,一摸一样,步骤也一摸一样,可是胶跑出来,师兄就有漂亮的条带,我怎么只有引物二聚体?我哭啊!!!!求高手赐教啊!!!有什么窍门啊???

不一定是你PCR做的有问题,有可能是跑胶的时候出来问题,看看配胶过程
10楼2010-01-28 12:44:05
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